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寒兰(Cymbidium kanran Mak)属于兰科(Orchidaceae)兰属(Cymbidium),是国兰的重要成员,具有株型修长,叶姿优雅俊秀,香味清醇等特点,有极高的观赏价值和经济价值。采用传统的育种方法已经不能满足人们对寒兰品种新、奇、特及多抗的要求。随着分子生物学技术的发展,采用基因工程技术对寒兰进行新品种培育及抗逆性改良已成为一个新的突破口。本研究以寒兰为实验材料,首先采用RT-PCR技术筛选出在寒兰中稳定表达的内参基因,再将筛选的稳定基因用于寒兰DREB基因的表达分析,得到结果如下：1.寒兰内参基因的筛选qRT-PCR技术结合生物学软件(geNorm、NormFinder)评价了9个常用的内参基因在寒兰不同组织中以及激素处理和非生物胁迫条件下的表达稳定性。非生物胁迫包括低温、高温、盐、干旱、重金属胁迫等,不同组织包括萼片、花瓣、唇瓣、合蕊柱、根、茎和叶,激素处理包括ABA、GA、NAA.6-BA处理等。我们将得到的荧光定量PCR数据分别用geNorm和NormFinder分析,以便筛选出合适的内参基因。比较geNorm和NormFinder两个软件的分析结果,发现两个软件的分析结果基本相同,只是在不同处理的根中,出现了一些不一致。进一步分析表明,这主要是由于这两个分析软件所基于的原理不同而造成的。综合两个软件的分析结果表明,在涉及到多个处理和组织器官时,Actin和TUB表达最稳定：在不同组织中,RPS3和rpoB最适合作内参基因；Actin和TUB在不同处理的根中表达最稳定：而在不同处理下的叶片中,Actin和28S作为内参基因最为可靠。2. DREB转录因子的表达分析应用qRT-PCR分析受高温、高盐、水涝等处理的24株寒兰,明确了寒兰DREB基因在不同逆境中的表达情况,确定了寒兰对胁迫诱导的应激能力。在热处理情况下,DREB基因的表达开始会迅速升高,在1h达到最高峰后缓慢下降,并在24h时再次急剧增加,达到最高峰,然后表达量又会逐渐下降。在进行高盐处理时,DREB基因的表达量在30min时会逐渐下降,然后急剧增加,在2小时时达到最高峰,此后,该基因的表达量会逐渐降低,24h时会再次达到高后又逐渐降低。在进行水涝胁迫处理时,DREB基因的表达量会逐渐增加,并且在2h时达到最高峰,此后,DREB基因的表达量会急剧减少,在第24h时,该基因的表达量又会逐渐增加,然后会再次降低。这些结果显示,DREB基因在寒兰受到胁迫诱导后能迅速表达,这表明DREB对于寒兰抵抗胁迫具有非常重要的调控作用,为寒兰DREB基因的分子育种奠定基础。