玉米cDNA文库的筛选和候选抗病相关基因片段的克隆

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该工作分两部分进行:一,利用部分同源探针筛选玉米cDNA文库,克隆相关基因,为该实验室筛选玉米核基因组BAC文库贮备技术.二,利用同源序列扩增法,根据已克隆的植物抗病基因保守序列设计引物,对玉米基因组DNA进行PCR扩增,以期得到玉米候选抗病基因.该工作Ⅰ:根据种属间基因的同源性,利用两组混合探针(探针Ⅰ、探针Ⅱ),分别筛选玉米叶片cDNA文库.探针Ⅰ由从水稻中分离的编码磷脂酶c,磷脂酰肌醇合成酶,磷脂酰肌醇激酶的基因片段组成;探针Ⅱ由来自大肠杆菌编码胆碱脱氢酶(CDH)基因(betA)和拟南芥的Na<+>/H<+>antiport基因(AtNHXl)组成.该工作Ⅱ:根据已经克隆的植物抗病基因和候选抗病基因保守序列P-loop、Kinase2及GLPLAL设计一系列简并引物,利用多种引物组合对玉米的基因组DNA分别进行PCR扩增、克隆,并对5个克隆进行测序.
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