【摘 要】
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[目的]:建立兔色素性脉络膜黑色色素瘤动物模型;应用兔眼脉络膜黑色素瘤血管造影和兔眼脉络膜黑色素瘤组织冰冻切片荧光显微镜观察的方法,研究国产新型光敏剂血啉甲醚(hemato
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[目的]:建立兔色素性脉络膜黑色色素瘤动物模型;应用兔眼脉络膜黑色素瘤血管造影和兔眼脉络膜黑色素瘤组织冰冻切片荧光显微镜观察的方法,研究国产新型光敏剂血啉甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)在实验动物兔脉络膜黑色素瘤眼部组织的双向分布,为选择光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)的时间提供依据.[材料及方法]1.(1)B16F10(鼠皮肤黑素瘤).用含有10％胎牛血清的DMEM培养基(Gibco),其中含有10％胎牛血清,含链霉素100μg/ml及青霉素100U/ml,37℃,5％CO2细胞培养箱中培养.收集培养的B16F10黑素瘤细胞悬液,使细胞悬液含量约为106个/30μl待用.种植时,将0.2mlB16F10细胞悬液注射于C57BL/6黑鼠后腿内侧皮下,10~14天左右可见一直径约1cm肿瘤生长,杀死鼠取出肿瘤;(2)在Hu LK等报道的经巩膜种植眼黑素瘤方法的基础上改良建立兔脉络膜黑色素瘤动物模型.将B16F10黑色素细胞株肿瘤碎片经巩膜种植于兔脉络膜下腔,动物肌肉注射环胞霉素A进行免疫抑制,用间接眼底镜、彩色多普勒检查(CDI)和眼底照相进行观察至肿瘤生长3~4mm后进行药物分布实验;2.(1)HMME血管造影法:应用TopconTRC 50IX眼底照相机、IMAGEnet2000成像系统,采集兔静脉注射HMME(10mg/kg)后96小时内肿瘤组织、眼底及虹膜血管造影图像,根据荧光在眼部充盈、消退的过0程推断药物的眼底和肿瘤组织分布;(2)组织冰冻切片荧光显微镜法:于兔静脉注射 HMME(10mg/kg)后的5,15,30,60,180,480分钟和24、48、72小时各取兔眼球2只制作组织冰冻切片,荧光显微镜下观察不同时间点药物荧光在肿瘤及眼部各组织的分布,根据荧光强度对HMME在兔脉络膜黑色素瘤及眼的组织分布进行半定量分析.同一张切片行HE染色明确组织形态.[结论]采用B16F10细胞株以肿瘤碎片种植建立兔色素性脉络膜黑色色素瘤动物模型,其肿瘤形状和生长速度有利于对眼黑色素瘤的研究;国产新型光敏剂血啉甲醚具有在兔脉络膜黑色素瘤模型眼脉络膜黑色素瘤选择性聚集、滞留,而在实验动物眼部正常组织快速分布、迅速清除的特点,静脉注射后3~4小时可能是光动力治疗的适宜时间,为今后探索国产新型光敏剂血啉甲醚眼部光动力治疗脉络膜黑色素瘤提供治疗时间的依据.
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