【摘 要】
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目的：构建降钙素原(PCT)基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达,以获取高产量、低成本、高纯度的PCT蛋白。 方法：按人的全长PCT cDNA序列,设计引物用标准的PCR法全基因
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目的：构建降钙素原(PCT)基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达,以获取高产量、低成本、高纯度的PCT蛋白。
方法：按人的全长PCT cDNA序列,设计引物用标准的PCR法全基因合成步骤合成扣除信号肽外PCT的片段,应用基因重组技术将该片段克隆到质粒pET21a(+)中,进行限制性内切酶酶切分析和DNA测序鉴定。将重组质粒转化大肠杆菌E. coli(DH5a),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,用Ni-NTA亲和层析纯化获取蛋白,用SDS-PAGE和western blot的方法鉴定。
结果：扩增出的人PCT片段于原核表达载体中克隆,经酶切和核酸测序鉴定,得到正确的重组质粒pET-PCT,并在大肠杆菌中得以表达。纯化后的蛋白经考马氏亮蓝染色呈单一条带；用抗PCT的抗体进行Western blot分析证明目的蛋白有反应性。
结论：本研究成功构建了表达基因重组人PCT的原核表达载体,基因重组人PCT蛋白在大肠杆菌中获得了表达和纯化,为进一步获得高纯度、高效价的单克隆抗体和开展临床检测提供了必要的条件。
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