乳清蛋白酶解及其产物分析方法研究

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由于乳清蛋白的营养价值、功能特性及其过敏性,乳清蛋白功能性食品和低过敏制品日益受到人们的关注。本文以乳清蛋白中的主要成分α-乳白蛋白和β-乳球蛋白为研究对象,研究了以下内容。 试验建立了同时测定乳清蛋白中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白含量的高效液相色谱分析方法。采用KromasilC8色谱柱(5μm,250mm×4.6mm),流动相A为0.1%的三氟乙酸-水溶液,流动相B为0.09%的三氟乙酸-乙腈溶液梯度洗脱,流速为0.8mL/min,二极管阵列检测器,检测波长:215nm,柱温:30℃。外标法定量,α-乳白蛋白和β-乳球蛋白两种组分线性关系良好,相关系数分别为0.9998和0.9984,检测限为3μg/mL和10μg/mL。加标回收率分别为92.3~95.6%,RSD分别为0.5%~3.9%。方法简便、快速、准确,是α-乳白蛋白和β-乳球蛋白定量测定的可靠方法之一。 试验建立了定量测定α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的SDS-PAGE电泳方法。研究了α-乳白蛋白和β-乳球蛋白上样的线性范围分别为0.25~1.75μg和0.16~1.44μg,在该上样量范围内其含量与总灰度值呈良好的线形关系,相关系数分别为0.9940和0.9912。 采用Alcalase2.4L、Papain18、Flavourzyme500MG、Protamex、中性蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶七种蛋白酶对乳清蛋白粉进行水解,通过HPLC方法测定酶解产物中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的酶解率最终筛选出Alcalase2.4L是α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的最佳用酶。应用响应曲面法,优化了Alcalase酶解α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的工艺条件。研究表明在α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的最适酶解条件为pH9.5,温度60℃,加酶量为450U/g蛋白,酶解时间30min。
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