【摘 要】
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禽流感(AvianInfluenza，AI)是由A型流感病毒感染引起的一种禽类传染病，部分高致病性禽流感病毒(HighlyPathogenicAvianInfluenzaVirus，HPAIV)对哺乳动物具有较强的致病性，并可直
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禽流感(AvianInfluenza，AI)是由A型流感病毒感染引起的一种禽类传染病，部分高致病性禽流感病毒(HighlyPathogenicAvianInfluenzaVirus，HPAIV)对哺乳动物具有较强的致病性，并可直接感染人，具有重要的公共卫生意义。本研究的目的是以H5N1亚型的HPAIVA/Chicken/Guangdong/174/2004(简称为AIV-174)作为免疫原制备单克隆抗体。将含毒尿囊液用0.1％BEI灭活后，差速离心法提纯，免疫6～8周龄的BALB/c雌性小鼠，首免用完全弗氏佐剂，加强免疫时用不完全弗氏佐剂，三免后取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，分别用全病毒包被的间接ELISA方法和血凝抑制(Hemagglutinininhibition，HI)试验方法检测细胞上清。将获得的阳性细胞克隆经有限稀释法进行多次亚克隆培养后，筛选稳定分泌特异性单抗的细胞株。
本研究一共获得2株能够稳定分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株，分别命名为4E4和8F11。4E4和8F11两株单抗的杂交瘤细胞上清的ELISA效价分别为1∶1024和1∶256，腹水ELISA效价分别为1∶12800和1∶6400，无HI效价；染色体计数分析结果显示，两株杂交瘤细胞的平均染色体数分别为98和101，在脾细胞与SP2/0细胞染色体数之和的范围之内；抗体亚类鉴定结果表明，两株特异性单抗的亚类分别为IgG1和IgG3，kappa链。选取ELISA效价较高的4E4单抗进行进一步研究，鸡胚中和实验结果表明4E4单抗无中和活性；SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明，4E4单抗与H5N1亚型的AIV在60KD附近出现一条特异性条带，说明这株单抗可能是针对AIV病毒的NP蛋白；4E4单抗的ELISA反应谱试验结果显示，该单抗与25株H5亚型中的24株和12株H9亚型的AIV分离株均有交叉反应，而与新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、鹅副粘病毒和产蛋下降综合症病毒无交叉反应，该单抗与H5和H9亚型AIV分离株ELISA反应的广谱性说明它针对的是病毒中抗原表位比较保守的蛋白，再结合Western-blot结果，进一步证实4E4单抗是特异性的针对AIV的NP蛋白。
抗H5亚型AIV的特异性单抗的研制成功，为AIV的抗原性分析、流行病学调查以及快速诊断方法的建立提供了技术支持。
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