【摘 要】
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目的：克隆，构建，鉴定人组织激肽释放酶基因真核表达载体：探讨其对肾性高血压大鼠的降压效应和机制。 方法：以pBluescripe Ⅱ KSKLK(+)质粒为模板，通过PCR的方法扩增出人组织激肽
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目的：克隆，构建，鉴定人组织激肽释放酶基因真核表达载体：探讨其对肾性高血压大鼠的降压效应和机制。 方法：以pBluescripe Ⅱ KSKLK(+)质粒为模板，通过PCR的方法扩增出人组织激肽释放酶基因(KLK)。将其克隆到真核表达载体pcDNA3的多克隆位点，构建成pcDNA3-KLK，进行酶切及测序鉴定。将pcDNA3-KLK质粒注入“两肾一夹”肾性高血压大鼠的股四头肌内，随后给予80V、1Hz、40ms电刺激6次，用RT-PCR和Western印迹实验检测人KLK基因在大鼠骨骼肌内的表达。每周测量大鼠收缩压两次。 结果：成功构建了人重组KLK真核表达质粒pcDNA3-KLK，经测序鉴定，表明：本研究克隆的人组织激肽释放酶基因与Genbank报告的人KLK基因序列一致，同源性为100％。 人KLK基因可以在骨骼肌中表达，并可释放入血，明显降低肾性高血压大鼠的血压，降幅达8-21mmHg，其作用至少可维持4周，较对照组有显著性差异。将pcDNA3-KLK转染大鼠后，在骨骼肌内有KLK-mRNA及蛋白的表达。 结论：成功构建了真核表达载体pcDNA3-KLK。应用电脉冲介导的基因的体内转移，可使人KLK基因在大鼠骨骼肌内有效表达效应蛋白并发挥其降低血压的作用。提示骨骼肌介导KLK基因，作为一种DNA药物治疗高血压，可能具有潜在应用价值。
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