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3-硝基酪氨酸（3NT）是蛋白质翻译后修饰中的一种硝基化修饰产物，非常稳定，常在病理状态下伴随活性氧和活性氮的增加而产生，与炎症、心血管疾病、糖尿病、神经退行性疾病和癌症等至少50种疾病关系紧密，被公认是体内活性氮的重要生物标志物。目前，3NT的检测主要采用HPLC及GC-MS等方法，与传统检测方法相比免疫检测方法如ELISA、WB等具有检测速度快、特异性强、操作简单而且灵敏度高和可选择性等优点，近年来日益受到国内外广泛关注。本研究的目的是制备抗3-硝基酪氨酸（3NT）单克隆抗体（McAb），为与3NT相关疾病的研究提供基础。通过戊二醛法合成3-硝基酪氨酸人工抗原：3硝基酪氨酸-戊二醛-鸡卵白蛋白（3NT-G-OVA）。经BCA测定其浓度，紫外扫描法，聚丙烯酰胺电泳法（SDS-PAGE）对人工抗原进行检测。将其作为免疫原，皮下注射免疫BALB/c雌性小鼠，按常规方法融合并经间接ELISA法筛选，制备稳定分泌抗3NT单克隆抗体的克隆细胞株，扩大培养，并对McAb的亚类、效价、亲和力及识别抗原特异性进行鉴定与分析，获得抗3NT单克隆抗体。收集糖尿病、类风湿性关节炎、肝硬化病人血标本，将抗3NT单克隆抗体初步应用于Western blotting检测样本的硝基化水平。同时用生物素标记制备的抗3NT单抗，作为包被于酶标板的第一抗体，过氧化物酶(POD)标记抗CTX-II多肽抗体作为第二抗体（POD-58-3），初步建立双抗体夹心ELISA法并进行了临床应用检测RA病人血清样本。1.成功合成了人工抗原3NT-G-OVA，测得其偶联率为5.4。2.成功获得了1株稳定分泌抗3NT单抗的杂交瘤细胞株，命名为2F6，单抗亚类试剂盒测定2F6的重链为IgG2a亚类；间接ELISA测定其腹水效价为1:6.14×10~6；单抗亲和力常数为7.81×10~7(M-1)；竞争ELISA鉴定2F6可特异性识别3NT。3.制备了一株具有较高免疫活性和特异性的抗3NT单克隆抗体，并成功用于糖尿病、骨关节炎以及肝硬化病人的硝基化蛋白水平的Western Blotting检测。4.夹心ELISA法检测RA病人血清样本测得的OD值比正常人高。成功的将抗3NT抗体临床应用，初步建立了夹心ELISA法，检测RA病人血清样本。5.提高了58-3抗体特异性识别CTX-II的灵敏度，为软骨降解产物CTX-II提供了一种新的检测方法。