植物内生真菌HCCB1621生物活性物质的初步研究

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:feylodiw
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植物内生菌作为一个多样性十分丰富的微生物类群,代谢产物非常丰富,包括杀虫、抗菌、抗肿瘤等活性物质,是人们寻找新型抗菌、抗肿瘤药物的重要资源。本论文利用上海来益生物药物研发中心的植物内生菌资源,通过各种模型的筛选,在获得活性菌株的基础上,对其中的一株进行了菌种鉴定,并对它们的次级代谢产物进行分离、纯化及活性初步研究。主要研究工作包括以下几个方面: 对1280株植物内生真菌进行了模型筛选样品的制备,共获得1280份样品,经模型初筛、复筛,共获得21份活性高且稳定的抗肿瘤细胞样品,8份具有较强抗菌活力的样品,选取其中一株HCCB1621进行了进一步的研究。 利用传统分类学方法、电子显微镜观察、18S rDNA和ITS序列的测定以及系统发育分析对菌株HCCB1621进行鉴定分类,根据各种指标鉴定其为木霉属真菌绿色木霉(Trichoderma viride)。 通过对菌株HCCB1621发酵产物的特性探索,发现活性物质具有热稳定性,在60℃处理1h,活性不丧失;经发酵培养 120h,产物抗肿瘤活性达到最强;活性物质在pH4-9范围内较稳定。 对菌株HCCB1621的代谢产物进行研究,应用大孔吸附树脂、溶媒萃取、硅胶柱分离、凝胶LH-20、HPLC制备等多种分离纯化手段,从其发酵液共分离出5个化合物,分别命名为HCCB1621-1,HCCB1621-2,HCCB1621-3,HCCB1621-4,HCCB1621-5,并对这些代谢产物进行质谱和核磁共振的<1>H-NMR和<13>C-NMR及二维图谱的解析,确认其分子量分别为256,396,112,376,110Da,并鉴定了HCCB1621-1~4的结构:分别为8,10-三甲基-四氮萘-2,4(3H,10H)二酮;麦角甾-7,9,22-三烯-3-醇;2,4(1H,3H)-嘧啶二酮;7,8-二甲基-10-(1’-D-核糖基)-异咯嗪,俗称核黄素。其中HCCB1621-1对A549、LoVo细胞具有一定的抑制作用,当浓度达到10μg/ml时,对直肠癌细胞LoVo的抑制率最高可达78.95%。对HCCB1621-5的抗菌效果进行研究发现,其对藤黄微球菌、白色念珠菌具有一定的抑制作用,对藤黄微球菌,相同浓度下其抑制效果较广谱性抗生素环丙沙星略差,达到其抑菌效果的71%。
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