大果西番莲(P.quadrangularis L.)的再生体系及转基因的研究

来源 :华南热带农业大学 海南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lifang877
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将种子的角质化外壳去掉,用4-8%的次氯酸钠溶液消毒8-10分钟,接到MS基本培养基上进行无菌萌发,获得无菌苗,根据种子的发芽情况,确定5%的次氯酸钠溶液消毒10分钟为最适消毒浓度和时间。以无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,在含有不同浓度BA和IAA的MS系列培养基上进行不定芽的诱导,根据不定芽生长情况,确定MS+BA2.0mg/L+IAA0.1mg/L为最适的不定芽诱导培养基MS1。将诱导出的不定芽接种在含有不同浓度IBA和NAA的MS系列培养基上,进行不定根的诱导,根据不定根的生长情况,确定MS+NAA0.5mg/L+IBA0.2mg/L为最适的不定根诱导培养基MS2。 将无菌苗子叶和下胚轴接种到含有Kan0、25、37.5、50、75、100mg/L的MS1培养基上培养,根据不定芽的生长情况,确定了不定芽诱导的选择压力。将在MS1培养基上诱导出的不定芽接种到含有Kan0、25、37.5、50、75、100mg/L的MS1培养基上培养,根据不定根的生长情况,确定了植株生根的选择压力。大果西番莲的再生体系的建立,为大果西番莲的遗传转化奠定了基础。 设计一对不含酶切位点的引物,以pBIC质粒为模板进行PCR扩增反应,将PCR产物克隆到pUCm-T克隆载体上,通过酶切鉴定和序列测定,筛选反向连接的克隆。把CMV外壳蛋白反向连接的基因插入pBI121,构建植物表达载体pBICr。用三亲交配法和DNA直接导入法将pBICr导入土壤根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens),通过农杆菌介导法转化大果西番莲,经过一系列的筛选,获得了40多株转基因苗。对其中较大的9株进行斑点杂交检测,其中一株呈阳性,证明本论文所建立的大果西番莲遗传转化体系是可行的。这将有助于完善西番莲的转基因体系,推进西番莲的抗病育种进程,促进西番莲产业的发展。
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