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目的:研究靛玉红对LPS刺激小鼠脾细胞所致炎症反应的治疗作用;探讨靛玉红调节小鼠脾细胞RIG-I、Gai2表达的作用机制。
方法：分离小鼠脾细胞后,分为LPS(-)组,LPS(+)组,LPS+靛玉红1μmol/L组,LPS+靛玉红51maol/L组,LPS+靛玉红10μmol/L组。分别培养72h后,收集细胞上清液及小鼠脾细胞。使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-17(IL-17)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-13(IL-13)表达。使用免疫蛋白印迹方法(Westernblot)检测小鼠脾细胞中RIG-I、Gai2的表达。
结果：(1)LPS(+)组细胞上清液中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17及TNF-α含量均显著高于LPS(-)组(P＜0.05):而LPS+靛玉红1μmol/L组、LPS+靛玉红51μmol/L组、LPS+靛玉红10μmol/L组细胞上清液中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17及TNF- α含量均显著低于LPS(+)组(P＜0.05);LPS+靛玉红5μmol/L组与LPS+靛玉红10μmol/L组细胞上清液IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17及TNF-α含量相比无明显统计学意义(P＞0.05),但两组均显著低于LPS+靛玉红1μmol/L组(P＜0.05)。
(2)LPS(+)组细胞上清液中IL-10、IL-13含量均显著高于LPS(-)组(P＜0.05);而LPS+靛玉红1μmol/L组、LPS+靛玉红5μmol/L组、LPS+靛玉红10μmol/L组细胞上清液中IL-10、IL-13含量均显著高于LPS(+)组(P＜0.05);LPS+靛玉红5μmol/L组与LPS+靛玉红10μmol/L组细胞上清液中IL-10、IL-13含量相比无明显统计学意义(P＞0.05),但两组均显著高于LPS+靛玉红1μmol/L组(P＜0.05)。
(3)LPS(+)组脾细胞中RIG-I、Gai2蛋白含量均显著高于LPS(-)组(P＜0.05);LPS+靛玉红1μmol/L组、LPS+靛玉红5μmol/L组、LPS+靛玉红10μmol/L组脾细胞中RIG-I、Gai2蛋白含量均显著低于LPS(+)组(P＜0.05),但显著高于LPS(-)组(P＜0.05);LPS+靛玉红5μmol/L组与LPS+靛玉红10μmol/L组脾细胞中RIG-I、Gai2蛋白含量相比无明显统计学意义(P＞0.05),但两组均低于LPS+靛玉红1μmol/L组(P＜0.05)。
结论：(1)中药单体靛玉红能够显著降低LPS刺激小鼠脾细胞促炎因子IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17、TNF-β的表达,显著增加LPS刺激小鼠脾细胞抑炎因子IL-10、IL-13的表达。
(2)中药单体靛玉红能够调节小鼠脾细胞RIG-I和Gai2表达,从而改变T细胞免疫稳态异常,起到消除炎症反应的作用。
(3)RIG-I和Gai2的调节与促炎因子及抑炎因子的表达有很强的相关性,提示RIG-I和Gai2可能是靛玉红调节LPS刺激小鼠脾细胞炎症反应的相关靶点。为进一步进行的UC治疗药物实验提供了科学的实验基础。
(4)提示具有清热解毒功效的中药药物可能通过降低抑炎因子分泌和促进抑炎因子分泌达到改善炎症的疗效,为具有清热解毒功效的中药药物使用提供了科学的实验基础。