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目的:研究喉鳞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达状况及其与临床病理特征之间的关系,阐明骨桥蛋白在喉鳞癌侵袭和转移过程中的作用,并为临床治疗及防治喉鳞癌侵袭、转移提供理论依据和新的思路。
方法:收集40例接受手术治疗并经病理诊断证实为原发性喉鳞癌(LSCC)患者病理组织石蜡标本作为试验组,另取40例同期手术切除经病理证实为癌旁阴性喉粘膜组织石蜡标本和40例同期手术切除经病理证实为成人喉原发性乳头状瘤病理组织石蜡标本作为对照组。所有石蜡标本5μm连续切片2张,其中1张行HE染色,证实为何病理组织,另外1张用免疫组织化学染色SP法检测OPN的表达。每批切片染色均以磷酸缓冲液(Phosphate Buffer Solution,PBS)代替一抗作阴性对照,以试剂盒内附阳性切片作为阳性对照。切片经二甲苯脱蜡,梯度酒精至水化;10 g/L双氧水阻断溶液处理阻断内源性过氧化物酶的活性,室温下避光孵育30min,三蒸水冲洗5min×3次;切片入0.1%,PH6.0枸橼酸缓冲液微波炉中热修复组织抗原;滴加非免疫性羊血清阻断组织中的非特异性吸附,37℃孵箱内孵育30min,倾去,勿洗;滴加1:200兔抗人骨桥蛋白多克隆抗体(一抗)4℃过夜,第二天在37℃孵箱内复温45min;滴加适当比例稀释的生物素标记的二抗,37℃孵箱内孵育20min,PBS冲洗3min×3次;滴加链霉卵白素-过氧化物酶溶液,37℃孵箱内孵育20min,PBS冲洗3min×3次;DAB光镜下控制染色3~10min;复染,系列梯度酒精脱水,透明,中性树胶封固;镜检,计数喉鳞癌组织、成人喉原发性乳头状瘤组织及癌旁阴性喉粘膜组织中OPN的阳性表达率。所得实验数据用SPSS14.0软件进行四格表资料χ2检验。
结果:OPN在喉鳞癌组中的阳性表达率为75.00%;在癌旁阴性喉粘膜组中阳性表达率为5.00%;在成人喉原发性乳头状瘤组中的阳性表达率27.50%;表达强度具有显著性差异(P<0.05)。OPN表达与喉鳞癌原发部位无明显关系(P>0.05),而与T分期呈正相关(P<0.05);有局部淋巴结转移组高于无局部淋巴结转移组,其比较具有显著性差异(P<0.05);与喉鳞癌细胞分化程度呈负相关(P<0.05)。
结论:OPN在喉鳞癌中高表达,与有无局部淋巴结转移、病理学分级、T分期等有关,与喉鳞癌原发部位无关。高表达的OPN在喉鳞癌的发生、发展、侵袭和转移中发挥作用,同时OPN可作为评估喉鳞癌进展、转移的有价值的指标。因此,我们推测阻断或抑制其表达和活性,干预传导通路中的某些关键位点,可能会成为有效治疗喉鳞癌的新思路。