人IB和X型磷脂酶A2蛋白的去折叠和重折叠

来源 :中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院 | 被引量 : 1次 | 上传用户:baohuse
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  哺乳动物分泌型磷脂酶A2是一组含有6-8个二硫键的,分子量为13-16kDa,水解甘油磷脂的酶。目前发现的这一组蛋白质共有10种,其中IB和X型酶都有前体形式。本论文以人的IB和X型磷脂酶A2为研究对象,研究了蛋白质的去折叠和重折叠反应。人IB型磷脂酶A2和其前体蛋白在大肠杆菌中皆以包涵体的形式表达。包涵体经重折叠后纯化得到均一的蛋白质。用圆二色,荧光和反相HPLC的方法研究了人IB型磷脂酶A2和前体蛋白在盐酸胍和DTT作用下的去折叠行为。 进一步的比较研究表明,L-精氨酸的这一功能与其特殊的分子结构有关。L-精氨酸帮助人X型磷脂酶A2的重折叠,表现为阻止了分子间二硫键的生成和重折叠之初的蛋白质积聚。另外,我们利用DsbA蛋白被金属硫蛋白还原后荧光增强的特性建立了金属硫蛋白的定量测定方法。
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