【摘 要】
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目的：联合采用免疫磁珠及流式细胞术分选猪骨髓极小胚胎样干细胞(VSELs);鉴定其生物学特性,并探寻体外培养、扩增猪骨髓VSELs的方法。方法：常规消毒、麻醉后穿刺猪髂后上棘获取
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目的：联合采用免疫磁珠及流式细胞术分选猪骨髓极小胚胎样干细胞(VSELs);鉴定其生物学特性,并探寻体外培养、扩增猪骨髓VSELs的方法。方法：常规消毒、麻醉后穿刺猪髂后上棘获取骨髓,使用红细胞裂解法获得猪骨髓单个核细胞,运用分别耦合了CD133和Lin抗体的磁珠进行免疫磁珠分选,对所得的CD133+细胞群和Lin-细胞群标记荧光抗体CD133、CD45及Lin,进一步通过流式细胞术分选获得VSELs,使用统计学方法分析两种分选方法的效率,并探讨联合分选的价值；使用光学显微镜及透射电镜观察猪骨髓VSELs的形态特征和超微结构,运用碱性磷酸酶染色和免疫荧光染色的方法鉴定其多能干细胞标志的表达；同时采用条件培养基对猪骨髓VSELs进行培养扩增,观察VSELs的贴壁及增殖情况。结果：联合采用免疫磁珠与流式细胞分选术能够高效的分选出猪骨髓VSELs,且使用CD133阳性分选较Lin阴性分选效率更高,但联合分选有费用高昂、细胞容易污染等缺点；猪骨髓VSELs约占总单个核细胞数量的0.01%-0.03%,该细胞体积较小、形态均一,呈二倍体核型、核大而细胞质少、核质比高,能够表达多能抗原标志Oct-4、Nanog和Sox2,同时碱性磷酸酶染色阳性；VSELs经条件培养基培养后3-4小时可见细胞贴壁,培养2-3周仍无明显增殖。结论：免疫磁珠及流式细胞术能够快速的从猪骨髓中分选出数量较多、纯度较高的VSELs；该细胞能表达胚胎样干细胞的特异性抗原标志,其生物学特性类似于胚胎干细胞,不易于体外培养、扩增。
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