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猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的母猪繁殖障碍及仔猪呼吸系统疾病,对养殖业造成了巨大的经济损失并广泛流行。ORF5基因是PRRSV分子流行病学研究的靶基因,本研究通过对河北省PRRSV的临床监测及其相关抗体的检测,为该病的综合防控提供科学的理论依据。 本研究通过RT-PCR法于2016年3月~2017年2月对河北省8个地区采集疑似PRRS的245份组织样品进行病原检测,共检测到阳性样品为156份,阳性率为63.67%,检出率较高。在该调查期间,石家庄、邯郸、保定的发病率较高,分别为70.91%,70.59%和69.49%;在时间分布上具有一定的变化趋势:夏季(2016年6~8月)和冬季(2016年12月~2017年2月)PRRSV阳性率较高,分别为75.00%~76.96%和67.74%~80.95%,而春秋两季区别不大。 为了解河北省PRRSV流行毒株遗传变异规律,将本试验获得的PRRSV ORF5基因序列通过DNAStar软件与参考毒株比对分析,14条ORF5基因序列之间的核苷酸同源性为82.3%~100.0%,氨基酸序列的同源性为80.6%~99.5%;与欧洲型代表株LV的核苷酸同源性为61.4%~63.8%,氨基酸同源性为51.7%~56.7%;而与美洲型代表株VR2332的核苷酸同源性为83.9%~89.6%,所推导的氨基酸同源性为80.1%~88.1%,这说明近年来在河北省流行的PRRSV毒株主要以美洲型毒株为主。其中5株毒株(HB-LF,HB-SJZ,HB-TS,HB-XT2,HB-BD2)与国内高致病性代表株JX-A1之间的核苷酸同源性为97.8%~99.3%,9株毒株(HB-ZJK,HB-CZ,HB-XT,HB-BD,HE-HS,HB-CZ2,HB-LF3,HB-LF2,HB-SJZ2)与2008年美国所分离的重组毒株同源性为92.2%~94.9%。根据进化树分析可得,本研究中获得的毒株分别位于以NADC30为代表的第Ⅴ亚群以及以JX-A1为代表的第Ⅲ亚群,说明PRRSV已发生了变异且毒株类型多样化。在本试验中,N-糖基化位点的数量也发生了变化,14株分离株中共含有8个糖基化位点(30,32,33,34,35,38,44,51),即氨基酸位点第38位为新增加的糖基化位点,且新增加的糖基化位点有向PNE靠近的趋势。 本研究通过ELISA法对2347份血清样品进行抗体检测,其中阳性样品(S/P>0.4)为1803份,阳性率为76.82%。不同地区中,唐山、邢台地区的阳性率较高分别为87.10%和85.42%,免疫效果较好,石家庄、沧州地区S/P>2.5的比例较高分别为15.37%和14.03%,猪只感染PRRSV风险比较大。根据猪群的不同生长阶段进行划分,血清抗体阳性率范围是69.56%~85.92%,S/P>2.5的比例为7.39%~17.69%,说明河北省PRRS免疫效果并不理想,且部分猪场已有PRRSV的感染。综上所述,根据本研究所获得的试验结果为河北省PRRS的诊断与监测提供了有效的理论基础及科学依据。