大鼠骨髓间充质干细胞移植治疗脑出血的磁共振成像研究

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目的探讨超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide, SPIO)标记大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs)立体定向脑实质内移植后,脑出血大鼠神经功能的恢复状况及SPIO标记的BMSCs在脑内迁移的磁共振监测。方法1.采用全骨髓贴壁法分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞,培养过程中倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,并采用免疫细胞化学技术鉴定其细胞表面抗原CD34、CD44、CD45和CD105。细胞培养6代后用于实验。2.采用不同浓度SPIO标记BMSCs,并对标记前后的BMSCs采用MTT法检测细胞活性变化。标记前后BMSCs均进行bFGF、DMSO和BHA联合诱导分化为神经样细胞,并采用RT-PCR方法检测各组细胞分化后Nestin、NSE和GFAP的mRNA表达情况。3.自体血注入法建立大鼠基底节区脑出血模型,取SD雄性大鼠40只,随机分成5组,A组:正常大鼠SPIO标记BMSCs移植组;B组:模型对照(假手术)大鼠SPIO标记BMSCs移植组;C组:ICH模型大鼠SPIO标记BMSCs组;D组:ICH模型大鼠未SPIO标记BMSCs移植组;E组:ICH模型纯培养液移植组。4.各组实验动物移植后3天、1周、2周、4周采用Longa法进行神经功能评分,于各时间点进行MRI检查,并于移植后3天、2周和4周取脑组织进行冰冻切片普鲁士蓝染色,用显微镜观察移植细胞在脑内的分布情况。结果1.全骨髓贴壁法获得的细胞经培养传代后,细胞呈现形态较为单一且均匀分布生长的梭形成纤维样外观,免疫细胞化学结果显示细胞表达CD44、CD105,而不表达CD34、CD45。2. MTT结果显示,不同浓度SPIO标记组与未标记的BMSCs间,吸光度值(OD值)差异无统计学意义(F=0.621,P=0.652>0.05)。且诱导分化后,不同浓度SPIO标记组与未标记组分化后Nestin、NSE和GFAP的mRNA表达水平差异亦无统计学意义。3.脑出血模型建立后,模型组与假手术组Longa评分差异有统计学意义,MRI检查显示模型1天大鼠右侧基底节区可见片状T1WI高信号,T2WI及SWI低信号出血灶。4.各组实验动物移植后3d、1w、2w、4w分别按Longa5分法标准进行神经功能评分,结果显示,A、B、C、D、E五组间相比,评分差异有统计学意义(F=55.02,P=0<0.05)。C组和D组移植不同时间点间的评分差异具有统计学意义(F=121.032,P=0.000<0.05)。5.移植后不同时间点MRI检查显示,SPIO标记BMSCs移植ICH模型组实验动物可见左侧顶叶皮质的片状低信号逐渐向右侧脑出血区迁移,普鲁士蓝染色亦证实蓝染BMSCs的迁移。结论1. SPIO标记对BMSCs的生物学活性、生长及分化无明显影响。2. BMSCs移植可促进脑出血大鼠神经功能的恢复,且SPIO标记对BMSCs促进脑出血大鼠神经功能恢复的作用无明显影响。3. BMSCs可向脑出血病灶周围组织定向迁移,MRI可作为标记干细胞移植活体监测的优选方法。
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