地鳖纤溶活性蛋白(EFP)分离纯化、红外光谱分析及抑制鸡胚尿囊膜(CAM)血管生成研究

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地鳖(EupolyphagasinensisWalker)又名土元,地鳖虫,属蜚蠊目(Blattaria)鳖蠊科(Corydiidae)真鳖蠊属(Eucorydia),是祖国医学中一传统活血化瘀类中药,为《中华人民共和国药典》记载的正品药材,雌性全虫入药。随着中医药的发展,地鳖虫的药理研究越来越深入,在医疗保健中越来越多地得到应用。 以传统中药材地鳖为原料,采用匀浆、盐析、硫酸铵分段沉淀、透析和DEAE-52纤维素离子层析等纯化方法,从其体内分离纯化得到一种纤溶活性蛋白(FibrinolyricProteinofEupolyphagasinensisWalker,EFP),采用SDS-PAGE电泳法对其进行了分子量和纯度测定,采用bradfore法测得其中的蛋白含量,采用蒽酮法测的总糖含量,采用纤维蛋白平板法测定EFP纤溶活性,采用红外光谱分析其主要官能团,采用鸡胚尿囊膜法在器官和体内水平观察EFP对新生血管生成的抑制效应,以小老鼠为实验对象对地鳖蛋白的溶血活性,出血性和凝血酶时间作用进行实验。 结果表明,从地鳖中提取纯化的EFP为相对分子量为41.3kD的单一成分,具有显著地纤溶活性,其中蛋白质含量为16.93mg/ml,蛋白质含量为红外光谱特征吸收峰表现蛋白质和糖的红外光谱特征吸收峰,推断EFP为一种糖蛋白,总糖含量为7.01%。EFP对鸡胚尿囊膜新生血管生成有良好的抑制作用,比阳性对照(地塞米松组)对鸡胚生长发育影响较小。地鳖虫纤溶活性蛋白组分具有抑制血管生成的作用,有可能用于肿瘤治疗。地鳖虫纤溶活性蛋白无溶血活性,无致出血性和延长凝血酶时间,并且对细菌也具有一定的抑制作用。地鳖虫的药用研究自古就有,但随着科学技术不断进步,人们已发现,作为具有多种生理和药理活性的中药地鳖虫有更多的药用价值。本实验为深入研究和开发地鳖虫提供一定理论依据,可时间关系未对机理进行深入的研究。
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