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酱油渣是酱油生产的副产品,其水分、盐分、脂肪含量高,还含有一定量的蛋白质、纤维、黄酮、磷脂等。目前对其开发利用有限,主要用作饲料或肥料的配料,附加值低,对其有效成分的提取分离及高值化利用是酱油渣开发利用的一个重要方向。因此,为了利用酱油渣资源,提取分离出有药用价值的大豆异黄酮,对酱油渣循环利用的研究将具有重要的意义。本文运用以酱油渣干粉为原料,采用实验室模拟动态逆流提取酱油渣中异黄酮,并通过正交设计对大豆类黄酮提取条件进行了优化,确定了大豆类黄酮的最佳提取条件为80％乙醇,提取前的浸泡时间12h,料液比1:10,得到总异黄酮提取率达0.35％,粗提物的纯度为2.01％。三种极性不同的大孔树脂填装制备柱,并利用中低压色谱对大豆异黄酮样品进行纯化。结果表明,NKA9大孔树脂对总大豆异黄酮的纯化效果最好,在60％乙醇洗脱时,产品纯度可达到32％.该方法能实施在短时间内对大豆异黄酮样品进行大量的纯化,满足大豆异黄酮产品生产的需要。运用高速逆流色谱(HSCCC)以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1:2:2:1.8,v/v)作为最佳的两相溶剂体系分离出酱油渣提取物中的组分,结合高压半制备色谱(prep-HPLC)对HSCCC得到的组分,从100 mg粗提物中获得9.5 mg大豆苷元(化合物1)和14.6 mg染料木素(化合物2)两种单体,纯度分别为98.1％和98.9％。经质谱数据、核磁共振氢谱分析结果与文献对照,以及标准品的色谱对比,确定提取出的单体的结构。
高速逆流色谱(HSCCC)是一种不用任何固态载体的液、液色谱技术,在分离一些简单体系和中、低极性样品体系方面存在其它分离技术无可超越的优势,但对于强极性的物质分离效果却受到溶剂体系的制约。本实验在高效逆流色谱分离天然产物的过程中加入硅胶微球,利用HSCCC溶剂系统和硅胶微球的协同作用,来改善天然产物的分离效果。
本文中在HSCCC分离小叶榕叶正丁醇粗提物的实验中,以0.1％三氟乙酸水-正丁醇-甲基叔丁基醚-乙腈-乙酸乙酯(5:1:1:1:3,v/v)作为最两相溶剂系统。在HSCCC体系中加入原硅胶,γ-氨丙基硅胶微球,以及ODS(十八烷基硅烷键合硅胶)三种微球,得到γ-氨丙基硅胶微球对分离效度的改善最为显著,在加入600 mg硅胶微球时使峰Ⅰ和峰Ⅱ之间的分离度Rs由1.21增大至1.99,峰Ⅱ和峰Ⅲ之间的分离度Rs由1.18增大至1.66。显然,加入γ-氨丙基硅胶微球与HSCCC协同作用是提高小叶榕极性部分物质的分离度的良好方法。在HSCCC分离酱油渣中中等极性的大豆异黄酮时,同样加入γ-氨丙基硅胶微球与溶剂系统相互作用,在加入400mg硅胶微球时,也使分离度Rs由1.57提到至1.75。
本文中将高速逆流与γ-氨丙基硅胶微球相结合对小叶榕叶正丁醇粗提物、酱油渣提取物进行分离,对比在两组不同极性的样品HSCCC分离过程中加入γ-氨丙基硅胶微球,小叶榕叶正丁醇粗提物分离度的提高更明显,说明带有极性官能团的硅胶对极性的样品的吸附作用更显著,比在中等极性样品中更有助于分离度的提高。利用逆流色谱的液液分配及其硅胶微球改性基团吸附分离的协同作用,将逆流色谱液-液分配原理与功能化硅胶微球的吸附分离功能有机的结合起来,以改善逆流色谱的分离效果,提高分离效率。