Dll4对K562细胞增殖及Rb蛋白表达的影响

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目的:本实验采用转染基因真核表达载体技术将pBudCE4.1-Dll4通过Lipofectamine2000转染慢性髓细胞白血病细胞株K562,观察Notch配体Dll4对白血病细胞株K562细胞生长及Rb蛋白表达的影响,进而探索Dll4对K562增殖抑制的具体机制。方法:试验分三组:正常对照组、阴性对照组(转染质粒pBudCE4.1)和实验组(转染质粒pBudCE4.1-Dll4)。用脂质体Lipofectamine2000法将各组质粒转染白血病细胞K562,①转染48小时后,收集各组细胞,RIPA裂解细胞,蛋白提取,免疫印记法(Western bolt)检测外源性Dll4瞬时转染的表达水平和各组细胞中Rb蛋白的表达水平;②转染48小时后,收集各组细胞,细胞计数试剂盒-8法检测各组细胞的增殖,比色法检测各组细胞的caspase3、caspase8的活性。结果:通过Lipofectamine2000,体外成功地将各组质粒转染入K562细胞,48小时后,①用Western bolt检测到各组K562细胞外源性Dll4、Rb蛋白的表达,用Quantity0ne软件行半定量分析,用SPSS统计软件进行数据处理及分析,实验组的Dll4、Rb蛋白表达比两个对照组明显增多,p<0.05,有统计学意义。②CCK-8法检测到各组K562细胞的生长曲线,实验组的细胞生长速度显著低于另外两个对照组,实验组caspase3、caspase8的活性高于两对照组,SPSS10.0软件包进行统计分析,p<0.05,有统计学意义。结论:重组质粒pBudCE4.1-Dll4转染白血病细胞K562后,Dll4、Rb的蛋白表达量增多,Rb蛋白的增加可能引起K562细胞的生长速度减慢、细胞凋亡。
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