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目的:研究神经轴突再生抑制因子Nogo-A在发育期大鼠脑癫痫持续状态后海马组织内的表达水平变化,并观察侧脑室注射Nogo-A反义寡聚核苷酸对其表达变化的影响。为进一步完善癫痫性脑损伤的分子生物学机制提供依据。
方法:腹腔注射戊四氮制作发育期SD大鼠(生后7天、14天、21天和28天四个日龄组)癫痫持续状态(status epilepticus,SE)发作模型。将各日龄组随机分为NS组、SE组,雌雄不限,选择处理后6小时、12小时、1天、2天、3天、7天七个时间点,采用RT-PCR和Western blot方法分别检测Nogo-AmRNA和Nogo-A蛋白在海马组织的含量变化。干预实验选择生后21天SD大鼠,随机分为反义寡聚核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)干预组(AS组)、随机序列干预组(NAS组)及非干预组(NS组),每组6只,雌雄不限,各组均于操作后6小时制作SE发作模型,选择处理后6h采用RT-PCR检测干预后Nogo-AmRNA及处理后1天Western blot检测干预后Nogo.A蛋白在海马组织的含量变化。
结果:
(1)各日龄组SE后6h Nogo-AmRNA含量较NS组明显升高,P均＜0.05,14日龄组在SE后12h Nogo-AmRN,A含量较NS组也明显升高,P＜0.05;而各日龄组SE后其余各时间点与NS组比较无统计学差异,P＞0.05;各日龄组SE后12h Nogo-A蛋白含量较NS组明显升高,P均＜0.05,7日龄SE后6h组及21日龄SE后1d组Nogo-A含量也较NS组明显升高,P＜0.05,而各日龄组SE后其余各时间点与NS组之间无统计学差异,P＞0.05:Nogo-A mRNA提前于Nogo-A蛋白发生变化,但两者变化趋势一致。
(2)在正常发育过程中,Nogo-AmRNA和Nogo-A蛋白在14日龄表达较其它日龄组明显增高,P＜0.05。
(3)Nogo-AmRNA表达在ASODN干预后6h较随机序列干预组、NS对照组明显下降,P＜0.05;而Nogo-A蛋白表达在ASODN干预后1d较随机序列干预组、NS对照组呈增高表达,P＜0.05。
结论:发育鼠海马组织Nogo-A mRNA在SE后6h表达增高,继而下降;Nogo-A蛋白在SE后12h表达增高,继而下降;二者变化趋势一致。侧脑室注射Nogo-A反义寡聚核苷酸能抑制SE后海马组织Nogo-AtuRNA的表达,而蛋白却呈增高表达。