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随着饲养管理条件的进步,开发利用卵巢储备,提高排卵率,培育优化高产仔力母猪提高生产效率,成为一大热点问题。FSH与其膜受体结合可以激活PI3K/AKT通路,促使卵泡发育,AKT2是PI3K/AKT通路的关键酶。APPL1是一种接头蛋白,能与FSHR的某些结构域结合,影响AKT2活性,促使卵泡颗粒细胞增殖和优势卵泡的形成,抑制卵泡闭锁。本实验以空怀丹系大白猪、空怀美系大白猪、空怀和怀孕皖南黑猪为对象,比较产活仔数,卵巢重和卵泡发育的差异,采用免疫组化和RT-PCR的方法分别研究FSHR、AKT2、APPL1表达位点及其mRNA表达量的相互关系。结果显示:(1)皖南黑猪和丹系大白猪产活仔数极显著高于美系大白猪(P<0.01)。(2)空怀丹系大白猪卵巢重极显著高于其他三组(P<0.01)。(3)HE染色显示:怀孕皖南黑猪组早期和晚期卵泡闭锁率极显著高于其他三组(P<0.01);空怀美系大白猪组晚期卵泡闭锁率>空怀丹系大白猪组>空怀皖南黑猪组(P<0.01)。(4)FSHR、AKT2和APPL1主要分布在各组猪卵巢中的初级卵泡、健康卵泡的颗粒细胞和膜细胞,在早期闭锁卵泡和晚期闭锁卵泡上弱表达或不表达;空怀美系大白猪组黄体各基因表达强度低于其他三组。(5)平均光密度值和IOD值测定:(1)空怀皖南黑猪组健康卵泡FSHR的平均光密度值显著高于其他三组(P<0.05),空怀美系大白猪组健康卵泡FSHR的IOD值显著高于其他三组(P<0.05);皖南黑猪组晚期闭锁卵泡FSHR平均光密度值显著高于其他两组(P<0.05),空怀皖南黑猪组晚期闭锁卵泡FSHR的IOD值显著高于其他三组(P<0.05)。(2)空怀皖南黑猪组健康卵泡AKT2的平均光密度值显著高于空怀美系大白猪组(P<0.05),空怀丹系大白猪组健康卵泡上AKT2的IOD值显著高于空怀美系大白猪组和空怀皖南黑猪组(P<0.05);空怀丹系大白猪组和怀孕皖南黑猪组早期闭锁卵泡AKT2的IOD值显著高于空怀皖南黑猪组(P<0.05);怀孕皖南黑猪组晚期闭锁卵泡AKT2平均光密度值显著低于其他三组(P<0.05),怀孕皖南黑猪组晚期闭锁卵泡AKT2的IOD值显著高于其他三组(P<0.05)。(3)空怀皖南黑猪组健康卵泡APPL1平均光密度值显著低于其他三组(P<0.05),空怀美系大白猪组健康卵泡APPL1的IOD值显著高于其他三组(P<0.05);怀孕皖南黑猪组和空怀丹系大白猪组晚期闭锁卵泡APPL1平均光密度值显著高于其他两组(P<0.05),怀孕皖南黑猪组晚期闭锁卵泡APPL1的IOD值显著高于空怀美系大白猪和空怀皖南黑猪组(P<0.05)。(4)各组猪早期和晚期闭锁卵泡FSHR、AKT2和APPL1的IOD值极显著低于健康卵泡(P<0.01)。(6)实时荧光定量:空怀皖南黑猪组卵巢组织中各基因mRNA表达量极显著高于其他三组(P<0.01);怀孕皖南黑猪组卵巢组织中AKT2和APPL1 mRNA表达量极显著低于其他三组(P<0.01);空怀美系大白猪组卵巢组织中FSHR、AKT2 mRNA表达量极显著高于空怀丹系大白猪组(P<0.01);空怀丹系大白猪组APPL1、AKT2 mRNA表达量极显著高于空怀美系大白猪(P<0.01)。(7)APPL1 mRNA表达量与晚期卵泡闭锁率呈极显著性负相关(P<0.01);FSHR与AKT2 mRNA表达量呈显著性正相关(P<0.05)。根据以上结果得出结论:(1)卵巢重和卵泡闭锁情况影响产仔母猪的生产能力。(2)FSHR、AKT2和APPL1主要分布在健康卵泡的颗粒细胞,在早期闭锁和晚期闭锁中弱表达,提示FSHR、AKT2和APPL1对生殖有调控作用,且健康卵泡颗粒细胞是FSHR、AKT2和APPL1调控的关键部位。(3)不同产仔能力的母猪FSHR、AKT2和APPL1表达量存在显著性差异,表明其表达量与产活仔数有关。(4)猪卵巢卵泡闭锁率与APPL1 mRNA表达量相关性表明,APPL1可能与抑制卵泡闭锁有关;FSHR与AKT2 mRNA表达相关性表明,FSHR的表达能调控AKT2的表达,从而调控卵巢的生殖生理作用。