南瓜多糖提取分离及抗氧化活性研究

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多糖具有各种生物活性功能,在保健食品与医药领域得到广泛的使用,多糖的开发利用和研究到人们密切的关注。南瓜是重要的药食两用植物,南瓜多糖是南瓜中重要的生物活性物质,具有降血糖、抗氧化、抗肿瘤、降血脂等功效。本文对南瓜多糖不同提取方法、不同协同方式进行了比较研究,并对超声波协同复合酶法提取南瓜多糖工艺进行了优化,将提取所得粗多糖通过DEAESepharoseFastFlow离子交换层析和SephacrylS-300HR凝胶过滤层析得到南瓜多糖组分,并对不同组分的抗氧化活性进行了研究,主要研究结果如下:   1、本试验确定超声波协同复合酶法提取南瓜多糖为最佳提取方式,在酶解的同时辅助超声波提取为最佳协同方式。   2、利用正交试验确定了复合酶较适宜用量为果胶酶42U/g,木瓜蛋白酶200U/g,纤维素酶40U/g;利用响应面设计优化了超声波辅助复合酶法提取南瓜多糖提取率的最佳工艺条件,建立了南瓜多糖提取的数学模型,较适宜工艺条件为温度51.5℃、超声波功率440w、液料比7∶1、pH值4.4;此模型的较适宜提取时间为20min,在此条件下,南瓜多糖提取率平均为4.39%。   3、进行了初步纯化的实验,在脱蛋白时采sevag法,脱除三次为最佳次数,可达去除蛋白质的目的,乙醇沉淀多糖时,选择醇沉浓度为70%;将得到的南瓜粗多糖通过DEAE-SepharoseFastFlow离子交换层析和SephacrylS-300HR凝胶过滤层析得到P11、P12、P21三个组分。   4、利用DEAE-SepharoseFastFlow进行离子交换层析,其最佳层析条件为:流速1ml/min,用pH7.2Tris-HC1缓冲液洗脱,洗脱体积100ml,然后用150ml0.7mol/LNaC1溶液洗脱,自动部分收集5min/tube。利用SephacrylS-300HR凝胶过滤层析,其最佳层析条件为:0.2mol/LNaCl洗脱,洗脱速度为0.5ml/min,4ml/tube。   5、对P11、P12、P21三个组分进行纯度鉴定与理化性质研究。结果表明:三组分为均匀单一组分,均难溶于冷水,易溶于热水,浓度大时呈胶体状态,不溶于乙醇、丙酮、乙醚等有机溶剂,三组分是糖类物质,不是淀粉性多糖,不合单糖等还原性糖,不合有蛋白质、酚类,组分P11、P12为中性多糖,组分P21为酸性多糖。   6、对P11、P12、P21三个组分进行抗氧化活性研究。结果表明:南瓜粗多糖、P12和P21清除DPPH自由基的IC50分别为:5.496mg/ml、8.908mg/ml、3.153mg/ml;南瓜粗多糖、P11、P12和P21清除羟基自由基的IC50分别为:4.251mg/ml、1.191mg/ml、7.655mg/ml、5.221mg/ml;南瓜粗多糖、P11、P12和P21的FRAP值依次为:0.182mmol/g、0.062mmol/g、0.082mmol/g、0.400mmol/g。
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