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血脑屏障(BBB)主要由脑微血管内皮细胞、胶质细胞周足等结构组成,是保护脑神经系统的一个重要的功能结构.前人经过研究认为GABA在BBB上的净转运方向时从脑到血,并通过动力学及抑制剂研究认为是由GAT介导的.为了从分子水平上证实GABA转运体在血脑屏障上的存在并探明其类别,我们通过RT-PCR的方法进行了研究.1.首先通过分离新生小牛脑,获得较纯净脑微血管片段.并通过RT-PCR的分子生物学方法确认这种不含神经元和胶质细胞污染的脑微血管内皮细胞RNA的完整性.这样,才能以提取出的脑微血管片段总RNA作为模板,确认BBB上GABA转运体的存在和具体的亚型.2.根据GenBANK的资料,采用己发现的4种亚型的GAT高度保守区段设计GAT简并引物.在获得了不含神经元和胶质细胞RNA污染的脑微血管片段总RNA后,应用此引物对脑微血管片段总RNA进行扩增,获得了特异性扩增的条带.在将PCR产物连接、克隆后,挑选插入片段大小适中的阳性克隆测序.将序列与GenBANK的数据进行分析比较,得到了与BGT-1高度同源的序列.3.而后,为了进一步确证以上的事实.利用另一种常用的血脑屏障模型——大鼠脑微血管内皮细胞培养物,使用GAT-1、GAT-2、GAT-3和BGT-1四种不同的引物分别对提取的RNA进行了扩增.经过RT-PCR反应条件的优化,结果显示大鼠脑微血管内皮细胞培养物有GAT2的存在.该实验研究从分子水平上证明了BBB上可能存在GAT-2和BGT-1 GABA转运体亚型,对于进一步了解BBB在GABA转运中的功能具有重要意义.对比其他研究结果,也为了解某些病理生理过程并寻求新的药物靶点提供了帮助.