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目的:发育性髋关节发育不良(DDH)是小儿外科常见的疾病,严重影响儿童生活质量,发病率约为1.1—3.8‰。目前DDH的真正病因不清楚,认为有两个主要危险因素:遗传因素和机械因素。本实验通过建立生后双下肢伸直襁褓体位动物模型及对实验动物大体标本与X线的观察,证实下肢伸直襁褓体位对幼鼠髋臼发育的不良影响;并从分子水平揭示下肢伸直襁褓体位对幼鼠髋臼软骨复合体不同区域骺板软骨细胞增殖、成熟、凋亡的影响,从动物实验方面证实双下肢伸直襁褓体位是发育性髋关节发育不良的主要病因之一。
方法:①将60只新生Wistar幼鼠用医用胶带将双小腿、双髋关节缠绕固定10日,保持髋关节伸直内收位,模拟双下肢伸直襁褓体位,作为组一;另将61只新生幼鼠伸髋、屈膝位医用胶带固定双小腿于双髋关节,制作腘绳肌完全松弛动物模型,作为组二;组一、二为实验组。另60只新生幼鼠双下肢不予处置,为组三,作为对照组。②分别于大鼠生后10d末、8w末处死实验动物。10d处死之大鼠处死前1h腹腔注射Brdu(100mg/kg),观察髋臼大体变化,制成石蜡切片,部分切片番红O—快绿染色。8w末处死之大鼠,通过大体标本及X线摄片,观察髋臼变化。③免疫组化显示髋臼软骨复合体软骨细胞中VEGF、Ⅹ型胶原及Runx2的改变,观察双下肢伸直襁褓体位对髋臼软骨复合体软骨细胞成熟变化。④溴2—脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)示踪有丝分裂期软骨细胞,观察双下肢伸直襁褓体位下骺板软骨细胞的增殖;应用TUNEL法检测双下肢伸直襁褓体位下骺板软骨细胞的凋亡。
结果:⑴下肢伸直襁褓体位动物模型制作成功,实验组髋臼较对照组髋臼外形发生明显改变,实验组髋臼指数及髂骨坐骨夹角明显增大(p<0.01),髋关节脱位率、DDH发生率明显增高(p<0.01),番红O—快绿染色可见实验组髋臼软骨较对照组宽(p<0.01)。⑵实验组VEGF、Ⅹ型胶原与Runx2主要阳性表达于髋臼软骨复合体的髂骨、坐骨、耻骨各支肥大区,但较对照组低(p<0.01)。实验组髋臼关节软骨髂骨支肥大区VEGF、Ⅹ型胶原与Runx2阳性表达较坐骨支、耻骨支低(p<0.01)。⑶对照组髋臼关节软骨耻骨支、髂骨近耻骨半侧支增殖区阳性细胞表达明显高于实验组(p<0.01)。实验组髋臼软骨复合体肥大区凋亡细胞较对照减少(p<0.01);增殖区与静止区凋亡较对照组明显增多(p<0.01)。
结论:双下肢伸直襁褓体影响幼鼠髋臼软骨复合体不同区域骺板软骨细胞增殖、成熟、凋亡,最终导致髋臼发育不良乃至髋关节脱位,是DDH病因之一。