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脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)，又名呕吐毒素(Vomitoxin，VT)，是目前全球谷物污染最严重的真菌毒素之一。在所有的易感动物中，以猪最为敏感。5 -HT在呕吐机制中扮演着重要的角色，色氨酸羟化酶(Tryptophan hydroxylase，TPH)的活性是5-HT合成的唯一前提，TPH在致呕吐的途径中具有重要的作用。本研究采用DON标准品，通过耳缘静脉注射该毒素于猪体内，通过实时荧光定量PCR的方法研究该毒素对猪脑干色氨酸羟化酶-2(Tryptophan hydroxylase-2，TPH-2)）基因表达的影响。
根据基因库里的猪TPH-2基因和β-actin基因序列，设计合成两对引物。利用SYBR Green I荧光染料，建立了检测猪TPH-2 mRNA的实时荧光定量RT-PCR方法。将TPH-2基因片段和β-actin基因片段克隆至PMD18-T载体上，以阳性质粒作为标准品，构建标准曲线，随后进行熔解曲线分析和稳定性研究。结果TPH-2基因片段和β-actin基因片段的Ct值线性范围分别为8.0-32.0、7.0-28.0，相关系数分别为0.999、0.998;熔解曲线显示产物都为单特异峰，Tm分别为76.9-J:0.2℃、84.0-x0.2℃；组内变异系数(CV％)为0.03％；组间试验无显著差异(P>0.05)。建立的检测猪TPH-2mRNA的Real-time RT-PCR方法具有扩增效率高、特异性好、重复性和稳定性良好等特点，为在mRNA水平对猪TPH-2的定量分析奠定了基础。
选用30头健康三元阉公猪，根据体重随机数字表随机分为三组，每组10头，采用耳缘静脉注射DON，注射浓度为：第一组为75 lag/kg b.w.，第二组为25 lag/kg b.w.第三组为注射生理盐水组作为空白对照。注射30 min后剖杀，取出脑干迅速分离延髓、脑桥、中脑、下丘脑，而后沿正中矢状面一分为二，液氮速冻，-70℃保存。按已建立的实时荧光定量方法对组织进行检测：加液氮进行组织研碎，抽提总的RNA，反转录合成eDNA，荧光定量PCR检测。动物试验结果显示，注射DON 75pg/kg b.w.组，静注7min左右，开始出现明显的中毒症状反应。具体表现为：狂躁不安，不停的磨牙，咀嚼，之后大量流涎，随之出现呕吐等症状，这一过程的持续时间在猪只中是一个间歇性持续的过程。而25 lxg/kg b.w.组，30 min内未出现明显中毒反应。荧光定量结果显示：在延髓、脑桥、中脑、下丘脑，注射生理盐水组色氨酸羟化酶mRNA转录水平最高，静脉注射75ug/kg b.w.组次之，静脉注射25 pg/kg b.w.组的最低。用Spass软件分析结果显示：在延髓和下丘脑，注射生理盐水组与75 lag/kg b.w.注射组和25 l.tg/kg b.w,注射组相比，差异极显著；75 lag/kg b.w.注射组和25 lag/kg b.w.注射组相比，差异不显著。在脑桥，注射生理盐水组与25 l.tg/kg b.w.注射组相比，差异极显著；注射生理盐水组和75ug/kg b.w.注射组相比，差异显著：75ug/kg b.w.注射组和25ug/kg b.w.注射组相比，差异显著。在中脑，注射生理盐水组与75ug/kg b.w.注射组和25ug/kg b.w.注射组相比，差异极显著；75ug/kg b.w.注射组和25ug/kg b.w.注射组相比，差异显著。推测：DON对色氨酸羟化酶-2的基因的表达作用可能是一个动态的过程，本试验取了30 min时间点，DON对色氨酸羟化酶的转录有抑制作用，其他时间点上如何影响TPH-2转录的分子机制尚须进一步研究。