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乌头碱(Aconitine)是乌头属植物(Aconitum Genus)的有效成分之一，既是乌头属中药的有效成分也是有毒成分，治疗窗窄且生物利用度较低，常因用药不当、误服或故意投毒等原冈，中毒事件在我国、日本及欧洲等国家地区时有发生。 药物体内动力学包括吸收、分布、代谢转化、排泄过程。本课题组前期工作者杨翠平博士已经完成了影响乌头碱的吸收过程的关键因素的研究，结果显示肠道外排转运体p-gp介导了乌头碱在肠道的外排，限制了其在肠道的吸收，是导致其生物利用度低的原因之一。体内动力学除吸收过程外，体内消除过程（代谢转化和排泄过程）也是影响药代动力学的重要因素。 目的: 1、建立生物样品中乌头碱的LC-MS/MS检测方法; 2、大鼠静脉给药后，测定给药后24 h血浆中乌头碱的浓度，获得乌头碱的体内总清除率CLtotal等药代动力学参数; 3、大鼠静脉给药后排泄研究，收集72 h的尿、粪样品，测尿、粪便样品中乌头碱原型得出肾清除率CLrenal、胆汁清除率CLbile; 4、建立MID法大鼠原位肝脏灌流模型，用西立伐他汀验证灌流模型;利用MID法大鼠原位肝脏灌流模型研究乌头碱的肝摄取机制; 5、探索乌头碱体内消除过程的关键因素，揭示机体潜在的表型或药物合用可能引起的药代动力学改变; 6、为含乌头碱类药物在临床用药、中毒后解救提供参考依据。 方法: 1、在液质联用仪API5000建立生物样品中乌头碱的LC-MS/MS检测方法。 2、大鼠静脉注射乌头碱50μg/kg，于给药前后从眼底静脉丛采血，LC-MS/MS测定血浆中乌头碱浓度，作药-时曲线图，DAS2.0软件计算动力学参数。 3、大鼠静脉注射乌头碱40μg/kg，于给药后0～2、2～4、4～8、8～12、12～24、24～36、36～48、48～72 h收集粪便、尿液样品，并记录各时段所收集的尿液体积和粪样品重量。测定尿、粪样品中乌头碱原型的浓度。 4、SD大鼠随机分组，行肝脏插管术，进行MID法原位肝脏灌流实验，用西立伐他汀作为阳性对照药验证灌流模型;利用MID法原位肝脏灌流模型研究乌头碱在肝脏的摄取机制;利用5kD超滤离心管进行乌头碱与白蛋白的结合率实验。 5、结合本项目前期研究结果，参考文献，计算出乌头碱的清除率相关参数。对乌头碱体内的消除机制进行综合评价，提出参考意见。 结果: 1、建立了具有灵敏的、特异性高的乙腈沉淀蛋白测定大鼠血浆中乌头碱的LC-MS/MS检测方法，AC的浓度在5～5000nM浓度范围内线性良好，相关系数(r)大于0.99。准确度在85％～115％范围内。 2、大鼠静脉注射乌头碱50μg/kg后，15 min后血药浓度下降一半，4h后血药浓度低于检测限，AC的药代动力学参数为AUC(0-t)14.82±3.79μg/L*h，t1/2=0.67±0.15h，总清除率CLtotal=3.16 L/h/kg。 3、大鼠静脉注射乌头碱(40μg/kg)后2～4 h尿液中原型排泄量最高，随后逐渐降低，12h后累积排泄量达到（54.72±3.85％，至72 h实验结束乌头碱经尿的累积排泄量占给药总量的（57.22±4.41％，乌头碱肾清除率（1.9 L/h/kg）。72 h乌头碱经粪便累积排泄率0.119±0.05％，其中24 h后粪便样品中乌头碱原型含量低于检测限。 4、乌头碱与白蛋白的结合率为95.1％;成功建立了MID法大鼠原位肝脏灌流模型;乌头碱的肝总清除率CLH为0.354 L/h/kg，CLH,app为0.401 L/h/kg，PSinf，MID为6.086 mL/h/kg。 结论: 1、肝消除不是乌头碱体内消除的关键限速因素，且OATP没有参与乌头碱的肝摄取。 2、肾消除是乌头碱体内的主要消除途径，且存在肾小管主动分泌。临床用药应主要预防肾转运体引起的药物相互作用。乌头碱在肾脏的消除机制，有哪些转运体参与，有待进一步研究。