产纤维素细菌培养基优化及分子标记

来源 :中国科学院武汉病毒研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qf0909
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一些细菌在生长过程中会产生一种纤维素,这种由细菌产生的纤维素被命名为细菌纤维素。细菌纤维素与植物纤维素相比有很多优良特性,如高纯度、高结晶度、高聚合度、高持水能力、高杨氏模量、高抗张强度以及较高的生物适应性和良好的生物可降解性等。细菌纤维素由于其优良的特性,应用广泛,日益受到人们的重视。   本研究以木醋杆菌作为出发菌株,以廉价原料配置培养基,希望通过培养基优化、紫外诱变等手段提高纤维素产量,为纤维素的大规模生产提供一定的理论基础。在利用木醋杆菌进行文物修复时,受真菌污染严重,本研究期望将潮霉素抗性基因转入木醋杆菌中,在有潮霉素的选择压力下进行修复,可以避免真菌污染。   通过单因素实验和正交实验确定了木醋杆菌产纤维素的最佳培养基配方:8%糖浆、65ml/L玉米浆、0.5%Na2HPO4和0.5%柠檬酸,初始pH值是5.5,最终使纤维素产量由原来的0.54g/L提高到1.763g/L,产量提高2.3倍。通过紫外诱变的方法,获得一株高产突变菌株,产量高达1.953g/L,比对照菌株的1.713g/L提高了14%。   利用基因工程技术成功构建了新型质粒pSET152-HYG,并尝试用电转化方法将新质粒转入到木醋杆菌中,虽然电转化方法没有得到预期的转化率,但最终通过接合转移将外源基因成功整合到木醋杆菌染色体上,成功构建了重组菌株A.xylinum-hygR。A.xylinum-hygR产纤维素能力稍微下降,但其抗潮霉素的浓度提高到400μg/ml以上,远大于一般真菌对潮霉素的耐受浓度(100μg/ml)。在选择压力条件下,A.xylinum-hygR可以有效控制细菌和真菌的生长。
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