【摘 要】
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目的:探讨原花青素(Procyanidins,PC)对β amyloid peptide(25-35),即A β 25-35诱导体外培养的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制.方法:用MTT比色法分析细胞存活率;Hoechst332
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目的:探讨原花青素(Procyanidins,PC)对β amyloid peptide(25-35),即A β 25-35诱导体外培养的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制.方法:用MTT比色法分析细胞存活率;Hoechst33258-PI荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变;DNA电泳观察细胞凋亡时特异性梯状条带(DNA-Ladder);流式细胞仪检测分析细胞凋亡情况及细胞周期分布的改变;试剂盒检测脂质过氧化产MDA、H<,2>O<,2>的含量和CAT活性的变化;通过RT-PCR和Westernblot从mRNA及蛋白水平检测p53、bcl-2、bax、par-4等基因表达水平的变化.结论:(1)A β<, 25-35>剂量依赖性降低正常培养的PC12细胞存活率,诱导细胞凋亡;(2)A β <, 25-35>可显著增加正常培养的PC12细胞MDA和H<,2>O<,2>含量,显著降低CAT活性;(3)A β <, 25-35>剂量依赖性增加正常培养的PC12细胞par-4、p53、bax mRNA和Par-4、P53、Bax蛋白表达,剂量依赖性降低bcl-2 mRNA和Bcl-2蛋白表达;(4)PC对正常培养的PC12细胞无损伤作用,可拮抗A β <, 25-35>的毒性,剂量依赖性增加细胞的存活率;(5)PC可降低PC12细胞内MDA和H<,2>O<,2>含量,增加CAT活性;(6)PC可剂量依赖性降低正常培养的PC12细胞par-4、p53、bax mRNA和Par-4、p53、Bax蛋白表达,增加bcl-2 mRNA和Bcl-2蛋白表达;(7)A β <, 25-35>可诱导去血清培养PC12细胞凋亡率明显增加,S期细胞分布比率显著增加,p53 mRNA和P53蛋白表达降低;(8)PC可降低去血清培养的PC12细胞凋亡率,S期分布比率显著降低,p53 mRNA和P53蛋白表达增加.该实验结果表明,A β <, 25-35>诱导正常培养的PC12细胞凋亡的机制可能是:A β <, 25-35>诱导PC12细胞氧化应激反应,进而引发脂质过氧化,上调par-4、p53、bax,下调bcl-2,从而引起凋亡.PC通过其抗氧化作用抑制上述过程,对细胞起保护作用.A β <, 25-35>诱导去血清培养的PC12细胞凋亡的过程中,细胞周期阻滞于S期,p53下调.PC可逆转上述过程,对细胞起保护作用.细胞周期分布改变与p53表达下调在A β <, 25-35>诱导去血清培养的PC12细胞凋亡过程中的确切作用,还有待进一步探讨.
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