【摘 要】
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副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）是一种仅对猪致病的革兰氏阴性杆菌,在特定条件下可引起猪的严重的全身性疾病,即格拉泽氏病。该病的特征病变为关节炎、脑膜炎和纤维素性浆膜炎。HPS常与猪蓝耳病病毒、猪圆环病毒等混合感染,使猪的呼吸道传染病变得更加复杂,是当前严重危害我国养殖业的重要的细菌病原之一。HPS至少有15种血清型,不同血清型之间毒力差异明显且几乎没有交叉保护力;灭
【基金项目】
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国家公益性行业（农业）科技专项（项目编号:201303034-11）
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副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）是一种仅对猪致病的革兰氏阴性杆菌,在特定条件下可引起猪的严重的全身性疾病,即格拉泽氏病。该病的特征病变为关节炎、脑膜炎和纤维素性浆膜炎。HPS常与猪蓝耳病病毒、猪圆环病毒等混合感染,使猪的呼吸道传染病变得更加复杂,是当前严重危害我国养殖业的重要的细菌病原之一。HPS至少有15种血清型,不同血清型之间毒力差异明显且几乎没有交叉保护力;灭活疫苗免疫可有效控制同种血清型HPS的感染,但对其它血清型的感染几乎不提供交叉保护力。所以,研制新型的免疫原性好,免疫作用时间长且可诱导交叉免疫保护力的弱毒疫苗意义重大。本研究旨在通过体外传代培养的方法致弱HPS血清5型强毒菌株SH0165,期望获得能够在仔猪体内诱导交叉保护力的弱毒菌株,为HPS弱毒活疫苗的研制提供候选菌株。主要研究结果如下:1.体外连续传代和生长特性研究:以血清5型HPS强毒株SH0165为亲本菌株,分别在37℃与40℃培养条件下用BHI+NAD培养基进行连续传代培养,保存每代传代菌株。分别用光密度法（OD值法）和活菌计数法（CFU法）测定了亲本菌株SH0165及其在37℃与40℃条件下150代、200代和250代的传代菌株的生长曲线,并建立这7个菌株的OD600值与CFU/m L之间的线性回归方程。结果表明,与亲本菌株SH0165相比,上述6个传代菌株的生长速度明显加快。2.传代菌株的毒力试验:本实验室前期以豚鼠感染模型对传代菌株的毒力进行了初步筛选,发现与SH0165相比,37℃和40℃培养条件下150代、200代和250代的传代菌株的毒力有明显减弱。因此,本研究以本体动物仔猪为感染模型进一步验证了上述6个传代菌株的毒力减弱情况。以死亡率、临床症状、组织病变程度和组织载菌量为综合评价指标,结果表明:与SH0165相比,传代菌株H37-250、H40-200和H40-250的毒力明显减弱,可作为候选菌株进行免疫原性试验。3.传代菌株的免疫原性评价:免疫原性试验中通过肌肉注射的方式对试验组仔猪分别用传代菌株H37-250、H40-200和H40-250进行2次免疫后用亲本菌株SH0165进行攻毒;免疫剂量和攻毒剂量分别为1×10~9 CFU和2×10~9 CFU。对照组仔猪直接通过肌肉注射的方式感染2×10~9 CFU的SH0165。首次免疫后2周进行二次免疫,二次免疫后2周攻毒;以攻毒后仔猪的死亡率、临床症状、组织病变程度和组织载菌量为综合评价指标,发现传代菌株H37-250、H40-200和H40-250可以诱导仔猪产生保护力。
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