左归丸、右归丸对β-catenin、Runx2调控BMSCs成骨分化及其甲基化的影响

来源 :陕西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wyy_9715072
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:本实验研究左归丸、右归丸SD大鼠含药血清在成骨诱导环境中的不同时间点干预诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化过程中,成骨靶基因β-catenin(β-链蛋白)、Runx2(成骨特异性转录因子2)的表达情况及其甲基化水平情况。以此阐明“肾主骨”的物质基础(主要)为骨髓间充质干细胞;功能基础(主要)为靶基因β-catenin、Runx2甲基化调控成骨分化,为治疗骨质疏松、骨坏死等疾病提供新的方法,也为中医“肾主骨”理论的创新提供新的思路。  方法:以3周龄(40g±5g) SD大鼠骨髓间充质干细胞为研究对象,采用贴壁筛选法和密度梯度离心法相结合的方法进行体外分离、纯化、培养骨髓间充质干细胞。通过细胞形态学观察及流式细胞技术的方法鉴定BMSCs。在对BMSCs进行传代纯化的基础上,制备左归丸、右归丸SD大鼠含药血清进行干预诱导,以成骨基因β-catenin、Runx2为靶基因,采用实时荧光定量PCR(Real time RT-PCR)、甲基化特异性PCR(MSP)等核心实验技术检测在成骨诱导条件下干预7天后(3天的实验研究前期已完成),观察靶基因β-catenin、Runx2的表达情况及其甲基化规律。  结果:(1)通过对体外分离培养的骨髓间充质干细胞进行流式细胞技术鉴定,细胞表面标记物为CD29阳性,CD90阳性,CD34阴性,CD45阴性,表达BMSCs表面标记物而不表达其它造血系干细胞等的标记物,符合骨髓间充质干细胞特性,证实所研究的细胞为来源于骨髓的骨髓间充质干细胞。(2)在成骨诱导环境中,含药血清干预7天后,经Real time RT-PCR检测,结果为:左归丸组、右归丸组诱导β-catenin基因的表达明显高于正常对照组、成骨诱导组,组间比较差异明显(P<0.05)。左归丸组、右归丸组诱导的Runx2基因的表达明显高于正常对照组、成骨诱导组,组间比较差异明显(P<0.05)。(3)在成骨诱导环境中,含药血清干预7天后,经甲基化特异性PCR检测,结果为:左归丸组、右归丸组β-catenin基因甲基化率明显低于成骨诱导组、正常对照组,组间比较差异明显(P<0.05)。β-catenin基因甲基化程度依次为右归丸组<左归丸组<成骨诱导组<正常对照组。左归丸组、右归丸组Runx2基因甲基化率明显低于成骨诱导组、正常对照组,组间比较差异明显(P<0.05)。Runx2基因启动子区域甲基化程度依次为左归丸组<右归丸组<成骨诱导组<正常对照组。  结论:(1)左归丸、右归丸具有促进成骨的作用。(2)左归丸、右归丸通过上调骨髓间充质干细胞成骨基因β-catenin、Runx2的表达,起促进BMSCs向成骨方向分化的作用。(3)左归丸、右归丸通过调控骨髓间充质干细胞成骨基因β-catenin、Runx2启动子区域低甲基化的表观遗传学机制,起促进BMSCs成骨方向分化的作用。
其他文献
那时摄影刚刚发明几十年,这位纳达尔应当是法国最早的摄影师之一吧?纳达尔拍摄的大多是黑白肖像--彩色胶卷还没有诞生嘛。他拍过许多著名人物,大作家雨果的最后一幅肖像就是他拍
期刊
山东荣成石岛湾,世界首座球床模块式高温气冷堆商用示范电站正在慢慢露出它的雏形。
山东宁阳蔬菜良种批发市场于1996年7月建立,经过近十年的开发建设,市场先后累计投资6500多万元,形成了农作物种子区、蔬菜良种区和一条中心街经营格局,并建起占地50亩,建筑面
介绍在三坐标数控铣床上完成车削、铣削、磨削等多种功能,成功地解决了多功能数控机床加工时的数控编程。 Introduced in the three-coordinate CNC milling machine to comp
今天下午第一节课下课后,我听见同桌杨重天笑嘻嘻地说:“咱们来玩儿吸墨水吧!”前排的男生艾宇哲和梁青松异口同声地说:“好耶!”他们的叫声把我的注意力从作业本上吸引到了
期刊
在飞速发展的时代,一切都显得那么快,快得让你眼花缭乱,快得让你不知所措,快得让你心烦意乱。这不,我和妈妈一起到郑州,面对高楼林立的城市、纵横交错的马路、奔驰穿梭的车辆
期刊
要问我的天敌是谁,唉,提到它的名字我就发抖。它就是可恶的--作文。一提到作文,我就脸色铁青,心如乱麻,头脑嗡嗡响。是哪个家伙发明了“作文”这个玩意啊!我就是死也不想写。
期刊
目的:观察MEBT/MEBO配合痂下注射MEBO治疗深度烧伤中后期创面的效果,探讨其对烧伤创面修复作用的机理,以期为治疗深度创面提供新的治疗方法,为 MEBT/MEBO的临床规范化应用,提供更
星期天,我正在家里津津有味地看着电视,突然听到了一阵怪声--“嘭嘭嘭”,好像是战争电影中的机枪声。接着又闻到一阵怪味。近前一看,哦,原来是妈妈在做饭。
期刊
星期五下午第一节课,林老师“大赦天下”放我们自由活动。我们顿时如放飞的小鸟拥到运动场,个个都想争分夺秒地好好玩一下。运动场上的体育器械成了我们的目标,滕焕品与卓文杰兴
期刊