化疗对上皮性卵巢癌免疫逃逸相关分子CD47和PD--L1表达的影响

来源 :北京协和医学院中国医学科学院 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lschx
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目的:  上皮性卵巢癌是妇科恶性肿瘤中死亡率最高的类型,而且通常发现时都为晚期。经典的治疗方法是肿瘤细胞减灭术辅以铂类为基础的术后化疗,虽然在初治时大部分患者对这一经典治疗有反应,但是随着治疗的进展绝大部分患者会出现耐药进展和复发。目前认为,肿瘤细胞减灭术的切净程度即术后残余瘤是预后的独立因素。新辅助化疗及间歇性肿瘤细胞减灭术由于其能够在术前缩小肿瘤,为晚期上皮性卵巢癌患者争取手术机会并增加肿瘤切净率和更好的围手术期获益,而在临床中被越来越多的使用。但是关于其不改善总体生存和可能促进耐药和进展的疑问也随之而来。除了传统的肿瘤耐药途径,肿瘤免疫逃逸是肿瘤发生发展过程中的一个重要机制,以此为基础发展的肿瘤免疫治疗在近十年取得了重大突破。其中CD47和PD-L1分别是肿瘤逃避固有免疫监视和获得性免疫监视的两个关键检查点,已经被作为免疫治疗靶点用于临床治疗和临床试验中。但是目前免疫治疗在卵巢癌的研究中尚未取得明显的疗效,其中一个原因是参与这些临床研究的患者均为经过反复手术和化疗后的晚期复发患者,化疗对卵巢肿瘤免疫逃逸尤其是CD47和PD-L1表达的影响尚不明确。因而一方面需要了解化疗究竟对肿瘤免疫逃逸有何影响;另一方面,选择合适时机、合适的患者是将卵巢癌免疫治疗效果最大化的关键。我们首先通过研究新辅助化疗的上皮性卵巢癌患者卵巢癌组织化疗前后两个免疫逃逸相关分子CD47和PD-L1表达的变化,之后研究两种上皮性卵巢癌细胞系SKOV3和ES2经顺铂处理后CD47和PD-L1的表达变化情况,试图探索化疗对上皮性卵巢癌免疫逃逸影响,从免疫逃逸角度探讨新辅助化疗对卵巢癌的影响,希望能为上皮性卵巢癌的治疗提供新思路。  方法:  1.收集2010年至2012年北京协和医院妇产科初诊的78例经新辅助化疗和间歇性肿瘤细胞减灭术的上皮性卵巢癌患者及其临床病理标本,使用免疫组化染色法,比较患者新辅助化疗前后配对手术标本中肿瘤细胞CD47和PD-L1的表达情况,分析CD47和PD-L1在化疗前后的变化及其表达情况与上皮性卵巢癌临床、病理特点及预后的关系。  2.qRT-PCR、Western Blot和流式细胞术比较顺铂在永生化人卵巢上皮细胞HOSE与两种上皮性卵巢癌细胞系SKOV3和ES2中的表达差异。  3.顺铂处理两种不同组织学类型的卵巢癌细胞系SKOV3和ES2,qRT-PCR、Western Blot和流式细胞术从mRNA、细胞总蛋白和细胞表面蛋白三层面比较顺铂对卵巢癌细胞CD47和PD-L1表达的影响。  结果:  1.新辅助化疗后,免疫组化SP法检测显示,在新辅助化疗前后两次标本中,CD47表达阳性率为分别为81.3%(61/75)和93.3%(70/75);PD-L1阳性率分别为92%(69/75)和90.7%(68/75),配对秩和检验提示新辅助化疗后CD47和PD-L1表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。化疗前卵巢癌组织CD47和PD-L1的表达情况与年龄、病理类型、病理分级、铂类敏感性、CA125下降情况、满意缩瘤术等临床病理特征无明显相关(P>0.05)。CD47高表达组和低表达组的中位生存期分别为CD47low38个月vs CD47high44个月,中位复发时间分别为CD47low9个月vsCD47high10个月,两组间OS(P=0.996)和PFS差异无统计学意义(P=0.872)。PD-L1高表达组和低表达组的中位生存期分别为PD-L1low组44个月vs PD-L1high组38个月,中位复发时间分别为PD-L1low组8个月vs PD-L1high组10个月,两组OS(P=0.874)和PFS(P=0.727)差异无统计学意义。  2.qRT-PCR、Western blot和流式细胞术结果提示,CD47和PD-L1在HOSE细胞中mRNA转录和蛋白表达水平均低于SKOV3和ES2(P<0.05)。  3.经顺铂处理后,两种卵巢癌细胞SKOV3和ES2中CD47和PD-L1的表达在mRNA和蛋白水平均有不同程度升高(P<0.05);CD47在卵巢癌细胞系化疗后主要表现为膜蛋白表达增加(P<0.05),总蛋白增加不明显;而PD-L1总蛋白增加更显著(P<0.05)。  结论:  新辅助化疗可增加卵巢癌组织免疫逃逸相关分子CD47和PD-L1的表达从而可能促进肿瘤免疫逃逸,临床在选择新辅助化疗的患者时应考虑这一问题,慎重晚期上皮性卵巢癌新辅助化疗的应用。顺铂可促进卵巢癌细胞系SKOV3和ES2CD47和PD-L1的表达。
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