盐芥根响应高盐的microRNA的分离与验证

来源 :中央民族大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:JIMCZ
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microRNA(miRNA)是真核生物及病毒中存在的由19~25 nt组成的一类内源性非编码的单链小RNA,主要是在转录后水平发挥调控基因表达的功能。植物miRNA中的调控作用不仅涉及植物的整个生长发育进程(如植物组织器官发育),而且参与植物对多种逆境胁迫(如营养胁迫、干旱胁迫、高盐胁迫、低温胁迫等)的响应。  近年来盐芥(Thellungiella halophila,又称T.salsuginea)作为盐生模式植物,其抗盐机理备受关注。本研究以高盐处理前后的盐芥根为材料,进行了盐芥根响应高盐的miRNA分离、鉴定与验证研究,获得的结果如下:  采用Solexa测序得到了95个保守盐芥miRNA、4个新的miRNA,根据miRNA在盐处理前后表达量的变化确定了25个高盐响应miRNA:13个上调miRNA、12个下调miRNA。采用了stem-loop RT-PCR和miRNA基因芯片验证Solexa数据的准确性。  植物miRNA在发挥作用时一般以完全互补或近乎完全互补的方式对靶基因进行切割,降解靶基因。因此利用psRNA软件预测高盐响应miRNA的靶基因,由于盐芥基因组信息未知,采用EST代替基因组进行预测,共得到了13个miRNA的靶基因,并采用RT-PCR确定对这些miRNA靶基因的表达量,与stem-loopRT-PCR得到的miRNA的表达量进行比对,结果表明12个miRNA通过负调控其靶基因发挥各种调控功能。  采用RLM-5RACE可以确定miRNA靶基因的切割位点。本研究采用RLM-5RACE方法得到了新3号miRNA对其靶基因7111的切割位点,位于结合位点上游42bp处。证实了miRNA通过在特定位点切割靶基因使其降解,发挥调控功能。  上述结果为研究miRNA在响应高盐胁迫中的调控作用提供了基础数据,同时为研究盐芥的耐盐分子机理提供了重要的依据。
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