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目的：肝纤维化(HF)是各种原因引起的慢性肝损伤所共有的病理改变，肝星状细胞(HSC)的活化增殖是HF形成的中心环节，细胞外基质(ECM)过量产生和沉积是形成HF，最终导致肝硬化、肝功能衰竭的主要原因。因此，抑制HSC活化增殖、促进HSC凋亡、抑制胶原合成分泌、促进胶原降解可抗肝纤维化。目前，抗肝纤维化尚无有效的治疗药物，西医抗肝纤维化治疗主要有抗氧化剂、细胞因子调节剂、血管活性物质调节剂、抑制信号通路等药物，这些药物或因毒性太大，或抗肝纤维化的作用不强，使临床应用受到限制。近年来，中医中药治疗肝纤维化显示出特有的优越性，包括单方和复方的应用和研究，有的研究已深入到分子水平。剔毒护肝方、复方861均从分子水平研究表明具有抑制体外培养的HSC增殖和促进HSC凋亡的作用[1,2]。舒肝颗粒主要是针对酒精性肝病(ALD)尤其是酒精性肝纤维化的防治。通过细胞实验已证明舒肝颗粒能抑制肝星状细胞的增殖，抑制胶原蛋白的分泌，可减少胶原纤维在肝脏内的沉积。
为了进一步探讨舒肝颗粒对肝纤维化的逆转是否有作用，采用舒肝颗粒作用于体外培养大鼠肝星状细胞，观察其是否对大鼠肝星状细胞凋亡有影响，以探讨舒肝颗粒对肝纤维化的防治作用的机制，为舒肝颗粒的临床应用进一步提供理论依据。
方法：
1．体外培养大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)。以5×104接种培养好的肝星状细胞在六孔板，培养24小时后，加入舒肝颗粒，分为三个浓度组：4.2mg/ml，2.8mg/ml，1.4mg/ml。加药作用24小时后，取出镜下观察细胞形态的变化。然后吹打细胞，使其成为单细胞悬液，收集细胞悬液，1500转/分离心，冷PBS冲洗后再离心，丢弃上清液，每根试管中加入100μl冷PBS,振荡摇匀，成单细胞悬液；调整细胞浓度1×106，缓冲液稀释1:4；取100μl悬液，于5ml流式管中加入5μl AnnexinV/FITC和10μl 20mg/ml的碘化丙锭，混匀后室温避光孵育15min；在反应管中加入400μl PB，流式细胞仪分析结果。
2．以5×104接种肝星状细胞在六孔板，培养24小时后加药，浓度组同前，加药培养24小时后，镜下观察。吹打细胞，使其成为单细胞悬液，收集细胞液，1500转/分离心，冷PBS冲洗后再离心，丢弃上清液，每根试管中加入100μl冷PBS，振荡摇匀，成单细胞悬液；调整细胞浓度1×106，缓冲液稀释1:4；取100μl悬液，于5ml流式管中加入5μl CD95抗体，混匀后室温避光孵育15min；在反应管中加入400μlPBS，流式细胞仪分析结果。通过流式细胞仪检测CD95，探讨舒肝颗粒诱导肝星状细胞凋亡的可能途径。
3．细胞培养后爬片，以同样的药物浓度作用24小时后，用4℃预冷1:1丙酮和乙醇固定；蒸馏水冲洗、PBS浸泡、双氧水消除内源性过氧化物酶的活性；采用SABC法，先滴加试剂A孵育15分钟，再滴加一抗Bax，37℃孵育3小时，PBS冲洗；依次滴加试剂B、试剂C，每次孵育10分钟，PBS冲洗三次；再滴加DAB显色剂，冲洗、晾干、封片；采用Image plus 7.0系统显微镜照相。4．重复上述实验过程检测Bcl-2。
结果：
1．正常对照组的凋亡率是3.4±0.82，不同浓度的舒肝颗粒1.4mg/ml，2.8mg/ml，4.2mg/ml，对肝星状细胞的凋亡率分别是：42.61±6.42,61.07±3.19,87.84±5.49，各组的凋亡率较正常对照组明显增高，差别具有显著性(P<0.05)。在1.4mg/ml组，肝星状细胞的早期凋亡率明显较正常对照组增加(P<0.05)，而中晚期凋亡率较少。在2.8mg/ml组，肝星状细胞的早期凋亡率和中晚期凋亡率均明显升高。4.2mg/ml组，肝星状细胞在舒肝颗粒作用24小时后，大部分已属于中晚期凋亡，早期凋亡较低浓度组明显减少，但较正常对照组仍明显增高(P<0.05)，从早期凋亡和中晚期凋亡的总体趋势看，随着浓度增高，总的凋亡率增加。
2.正常对照组的CD95的表达率是0.10±0.03,不同浓度的舒肝颗粒1.4mg/ml，2.8mg/ml，4.2mg/ml，对肝星状细胞的CD95的表达率分别是：4.77±0.84，9.44±0.61，24.51±5.91(P<0.05)，并随着浓度增高，CD95的表达率也增高。
3．Bax的表达正常组最少，随着药物浓度组的增高，Bax的表达增高，且差别有显著性(P<0.05)，Bcl-2的表达，药物浓度组与正常对照组无明显差别(P>0.05)。Bax/bcl-2的比值随着药物浓度组的增加而比值升高。
结论：
1．舒肝颗粒可诱导肝星状细胞的凋亡，且呈浓度依赖性；
2．舒肝颗粒可能通过介导Fas系统促肝星状细胞凋亡；
3．舒肝颗粒可以通过促进Bax的表达，可下调Bcl-2/Bax比率，以增加细胞对凋亡的敏感性，从而促进HSC凋亡。