松茸等六种真菌化学成分及生物活性研究

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本论文论述了对6种真菌的化学成分及其生物活性的研究,它们分别是食用真菌松茸(Tricholoma matsutake)子实体、两种药用真菌轮层炭壳菌(Daldinia childiae)和灵芝(Ganoderma lingzhi)子实体、高等真菌赭黄齿耳(Steccherinum ochraceum)和毛韧革菌(Stereum hirsutum)液体发酵及毛韧革菌大米发酵,以及芳香喇叭菌(Craterellus odoratus)内生真菌(Montagnula donacina)发酵液。  采用各种分离手段,包括正相柱色谱、凝胶柱色谱、中压液相色谱(MPLC)、高效液相色谱(HPLC)等分离方法对上述高等真菌化学成分进行分离纯化得到单体化合物,再通过核磁共振谱(包括1H和13C NMR,HSQC,1H-1H COSY,HMBC,ROESY)、质谱、旋光、红外光谱、紫外光谱,结合计算化学手段及X射线单晶衍射等方法对这些化合物的结构进行鉴定。共分离得到255个化合物,包括122个新化合物。化合物类型主要为萜类(倍半萜,三萜,甾体,杂合萜类)等。  松茸(Tricholoma matsutake)学名松口蘑,隶属担子菌亚门、口蘑科,是松栎等树木外生的菌根真菌。其子实体具有独特的浓郁香味,是世界知名的珍稀天然食用真菌。本研究组对采自西藏的松茸子实体(干重2kg)提取物的乙酸乙酯层进行了化学成分研究。本研究首次从该种真菌子实体中分离得到具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的新颖骨架甾体化合物松茸酮(matsutakone,IC5020.9μM),并且首次从高等真菌中发现长松叶烷倍半萜类次生代谢产物。  轮层炭壳菌(Daldinia childiae)属于炭角菌科(Xylariaceae)轮层炭壳属(Daldinia),主要生长在桦、椴、胡桃等阔叶树的腐木和树皮上。该实验首次对该真菌子实体(湿重7kg)化学成分进行研究,共分离鉴定了22个化合物,其中包括12个苯环衍生物(4新),4个真菌毒素(2新),2个含氮类化合物(1新),1个C-8-C-14键断裂的甾体类新化合物。生物活性结果显示childininB具有较强的抗金黄色葡萄球菌的作用,MIC90为54.9μg/mL;甾体(childinasterone A,IC5021.2μM)有中等抗NO生成活性和微弱的细胞毒活性。  灵芝属于多孔菌科灵芝属真菌,是著名的中药。本研究从灵芝(Ganoderma lingzhi)子实体(干重10kg)中共分离76个化合物,包括8个新的倍半萜,32个三萜(12新),3个甾体(1新),及33个杂合萜类(32新)。  毛韧革菌(Stereum hirsutum)是多孔菌科(Polyporaceae)韧革菌属(Stereum)的一种木腐真菌。本研究对毛韧革菌进行了两种模式发酵—液体(70L)和大米固体,共分离得到87个化合物,包括甾体,苯酯衍生物,倍半萜(类型涉及12种倍半萜和一种新的seco-illudalane)。生物活性测试结果显示甾体具有较好的细胞毒活性,杂合萜类(stereuin B,MICs05.24μg/mL)能显著抑制金黄色葡萄球菌的生长,个别倍半萜(sterehirsutumine M,IC5013.91μM)可以显著抑制炎症介质NO的生成。  赭黄齿耳(Steccherinum ochraceum)别名绒盖齿菌,是一种木腐菌。从该发酵液(50L)中共分离鉴定21个化合物,其中14个新化合物,类型涉及倍半萜(chamigrane型,毛韧革菌素型,杜松烷型),链状化合物和甾体。活性测试结果显示这些化合物均没有表现出明显的细胞毒和抗炎活性  芳香喇叭菌(Craterellus odoratus)是一种不可人工栽培的美味的食用高等真菌。我们修正该菌株实质为芳香喇叭菌内生真菌Montagnula donacina,并对其进行扩大发酵培养(60L),从中分离鉴定23个化合物,8个新化合物(4个新的佛手柑完型(bergamotane)类型的倍半萜),通过X射线单晶衍射确定了donacinolides A和B的绝对构型。活性结果显示化合物(Z)-4-hydroxy-3-(3-hydroxy-3-methylbut-1-en-1-yl)-benzoic acid具有一定的抗金黄色葡萄球菌的作用。
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