新型K<'+>通道配体BmP02和Martentoxin的原核表达及其药理活性鉴定

来源 :上海大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qiuxue6
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
蝎毒中含有丰富的生理活性物质,大量积累的资料已证实其中的主要致死成分是一类由60-70个氨基酸残基组成,选择性作用于Na+通道的长肽毒素。此外,还发现了一些对K+或Cl-通道具有选择性阻断效应,由28-40个氨基酸组成,内含3或4对二硫键的小分子多肽。根据结构的同源性,这些小分子多肽可分为若干类型。目前,这些毒素多肽已作为十分有价值的探针被广泛地应用于相关靶离子通道分子调控机理的研究,有些已被开发为国际市场昂贵的试剂工具物商品,同时,为构建系列肽类药物提供了理想的分子模板。   本论文工作主要利用分子生物学和生物化学方法,对两个被命名为BmPO2和martentoxin的新型K+通道配体进行了表达、纯化及药理活性鉴定。利用一对特异性的引物,运用反向PCR技术对pGEX-4T-3表达载体进行了改造,在大肠杆菌胞质中以GST融合蛋白的形式表达,过亲和柱纯化,得到了单一的融合蛋白成分。再经Enterokinase酶切,Sephadex G50纯化程序获得了多肽片段。目的产物经HPLC和质谱分析结果表明,BmP02和martentoxin的结果均与设想相一致。通过膜片钳对表达有BK通道(a+β4)的HEK293细胞的全细胞记录表明重组martentoxin的活性约为天然产物的8%。究其原因,认为最大的可能性是由于天然martentoxin的C端存在酰胺化,而原核表达的重组martentoxin的C端为羧基,具体的原因仍需进一步的验证。BmP02的功能鉴定正在进行当中。
其他文献
洪水灾害是严重的自然灾害之一。江河防洪系统优化调度是一项重要的工作,协调运用防洪系统的各项措施将有效地降低洪灾损失。 本文针对有水库、堤防和蓄洪区组成的江河防洪
  The goal of this study was to determine if neurofibromin is expressed in cultured human osteoblasts and chondrocytes that were isolated from ilia and ilial
会议
  Study Design.A case report is presented.Objective.To investigate atypical syringomyelia without cavity.Summary of Background Data.Syringomyelia without fran
会议
  Paraplegia was reported after occlusion of the segmental vessels during anterior spinal surgery.The aim of this study was to investigate the effect of occlu
会议
近年来,随着工农业生产的发展和人口的增多,水资源供需矛盾日益突出,旱情威胁也越来越大,因此,快速收集信息,准确评估旱情,合理进行决策就显得更加重要,抗旱决策支持系统就是为了辅助
随着计算机技术发展,人们在研究河流泥沙问题时,越来越多的采用了数学模型,研究对象也由一维问题逐步发展到二维以及三维问题。水沙数学模型及河岸稳定模型已经成为研究河道水沙
随着经济的发展,国家对水利工程的安全日趋重视,土石坝在众多的水库坝型中占很大比重,而且多修建于技术相对较低、使用设备简陋的年代。所以,土石坝的安危是关系到国民经济发展和
会议
  Study Design.A genetic association study to comprehensively investigate variations of melatonin receptor 1B gene polymorphism by a set of tagging single nuc
会议
会议