【摘 要】
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动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是威胁人类健康的常见心脑血管疾病,在全球死亡因素中排在第二位,其发病机制至今仍未完全阐明,脂质代谢紊乱是其发生的重要原因。肝细胞脂
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动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是威胁人类健康的常见心脑血管疾病,在全球死亡因素中排在第二位,其发病机制至今仍未完全阐明,脂质代谢紊乱是其发生的重要原因。肝细胞脂质代谢紊乱使过多的甘油三酯(Triglyceride,TG)聚集在细胞内,导致高甘油三酯血症的发生,进而引发动脉粥样硬化。人载脂蛋白M(apolipoprotein M,apo M)是新近发现的一种载脂蛋白,主要在肝细胞和肾小管上皮细胞表达,参与前β-HDL的形成及胆固醇逆向转运而具有抗AS的作用,并对PPARγ(Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Gamma)的表达有影响。在小鼠细胞中,PPARγ又可结合于脂肪特异性蛋白27(Fat Specific Protein 27,FSP27)启动子区,进而调节其表达。诱导细胞死亡的DFF45样效应因子C(cell death-inducing DNA fragmentation factor 45-like c,cidec)在小鼠体内又叫FSP27,最先在小鼠脂肪细胞中分离得到,随后在人肝细胞、脂肪细胞等细胞中相继发现,与动脉粥样硬化有密切关系,迄今为止cidec的表达机制还不清楚。本研究的目的是为了探究在人细胞中apo M通过PPARγ而调节cidec基因表达的分子机制,为动脉粥样硬化等疾病的治疗提供新的靶标。在前面研究的基础上,首先分离纯化人apo M蛋白,检测其对PPARγ表达的调节,进而构建cidec启动子区域不同长度片段的报告基因质粒,转染人Hep G2细胞中,进行报告基因实验探究PPARγ对cidec表达的分子机制。实验结果如下:⑴离子交换层析法比超速离心法分离纯化人apo M的效率高;⑵人apo M蛋白能够下调人肝癌细胞中PPARγ的表达;⑶PPARγ能结合于人cidec启动子区-2289~-1800bp区域而调节cidec的表达。
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