基于RAW264.7细胞的补骨脂和罗布麻花多糖免疫增强功能评价

• 作 者: 王宏琳
• 出 处: 河南大学
• 发表日期: 2004年期
• 关键词: RAW264.7 补骨脂多糖 罗布麻花多糖 免疫调节 NF-κB MAPK

来源于植物的多糖因其具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗炎、抗氧化、神经保护、抗高血糖等活性而备受关注。本课题组前期对补骨脂多糖和罗布麻花多糖进行了提取分离和纯化,均分别得到2个组分:补骨脂多糖PCp-Ⅰ、PCp-Ⅱ,罗布麻花多糖Vp2a-II、Vp3。课题组前期研究发现PCp-I和PCp-II均表现出显著的抗A549肺癌细胞活性,Vp2a-II可通过外源性途径和内源性凝血途径抑制凝血,Vp3可通过外源性途径抑制血液凝固,而免疫学活性未见报道。通过开展预实验,本研究发现PCp-Ⅰ、Vp2a-II、Vp3具有一定的免疫调节活性,进而对该3个组分进行调节机制研究。研究方法:采用MTT法检测多糖对RAW264.7细胞活性的影响,中性红法检测组分多糖对RAW264.7细胞吞噬活性的作用,NO试剂盒法测定多糖对RAW264.7细胞NO分泌水平的影响,ELISA法检测RAW264.7细胞分泌细胞因子的水平,流式细胞术检测RAW264.7细胞上ROS的表达水平,q RT-PCR法检测免疫相关因子i NOS、TNF-α、IL-6和IL-1βm RNA以及TLR4和My D88 m RNA表达水平,Western blot法检测细胞内蛋白表达水平实验结果:补骨脂多糖PCp-Ⅰ处理过的巨噬细胞的NO释放水平随着i NOS m RNA表达的上调而升高。PCp-Ⅰ能显著上调RAW264.7细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β的m RNA表达,进而增加了相应细胞因子的表达。另一方面,PCp-Ⅰ可以增加ROS的表达,增强了RAW264.7细胞的吞噬活性。此外,PCp-Ⅰ能显著上调p65、p38、ERK和JNK相关蛋白的磷酸化水平,而使用相关蛋白对应的抑制剂可以抑制PCp-Ⅰ对相应蛋白表达的上调。由此可知,PCp-Ⅰ能通过激活TLR4介导的MAPKs和NF-κB信号通路激活巨噬细胞,上调蛋白m RNA的表达水平,增加细胞因子的释放,从而发挥RAW264.7细胞的免疫调节功能。与补骨脂多糖类似,罗布麻花多糖Vp2a-II、Vp3也具有免疫调节作用。罗布麻花多糖通过MAPKs和NF-κB信号通路激活巨噬细胞,促进NO和细胞因子TNF-α、IL-6的分泌、增强了RAW264.7细胞的吞噬活性,q RT-PCR实验结果也表明Vp2a-II、Vp3能够提高相应蛋白m RNA的表达水平。