【摘 要】
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Ⅰ型单纯疱疹病毒(Herpes Simplex Virus 1,HSV-1)是一种常见的病原体,人是其唯一自然宿主。病毒通过受损皮肤及粘膜感染宿主,在上皮组织增殖,且能进一步从感染的上皮组织的神经
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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Ⅰ型单纯疱疹病毒(Herpes Simplex Virus 1,HSV-1)是一种常见的病原体,人是其唯一自然宿主。病毒通过受损皮肤及粘膜感染宿主,在上皮组织增殖,且能进一步从感染的上皮组织的神经末稍入侵神经元,并于初次感染后在三叉神经节、背根神经节等处建立伴随终生的潜伏性感染。
HSV-1 UL25基因编码一个重要的病毒衣壳蛋白,位于衣壳外表面五邻体顶角附近。目前研究发现该蛋白参与了病毒感染过程中的许多重要生物学过程,包括病毒在细胞内的转运、增殖、装配等。利用酵母双杂交筛选技术,我们发现UL25与宿主细胞不同的结构性和功能性蛋白存在相互作用,其中之一为与细胞骨架微管蛋白的相互作用。半乳糖苷酶活性分析实验显示两者的相互作用具有特异性。
将UL25重组到绿色荧光报告载体pEGFP-N2中,对构建的UL25-EGFP融合蛋白进行细胞内荧光分析,结果表明UL25分布于细胞质中,与经免疫荧光染色的细胞骨架微管蛋白共定位。进一步利用秋水仙碱破坏细胞骨架微管结构后,发现UL25的分布与紊乱的微管蛋白亦基本重合,表明两者在空间上具有明确的相互作用关系。由于HSV病毒在被感染细胞内沿细胞骨架微管移动,基于上述双杂交实验和荧光分析,推测UL25可能在病毒衣壳细胞内转运中具有重要的意义。
实验进一步对UL25基因不同片段的缺失突变体进行荧光定位分析,结果发现U125 135-353aa和其羧基端360-580aa与UL25蛋白定位相似,而UL25氨基端140aa除在胞质内与微管蛋白共定位外,还同时定位于细胞核中。结合酵母双杂交实验筛选到UL25与细胞内转录调控蛋白如转录延伸因子存在相互作用的事实,提示UL25蛋白在核内参与了某些未知的功能作用,氨基端可能是其与不同蛋白相互作用的重要区域。
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