诱导人脐带间充质干细胞向类颗粒细胞分化的实验研究

• 作 者: 李玉
• 机 构: 安徽医科大学
• 出 处: 安徽医科大学
• 发表日期: 2018年期
• 关键词: 卵巢早衰 人脐带间充质干细胞 颗粒细胞 细胞分化

背景：卵巢早衰（premature ovarian failure,POF）是指女性40岁之前出现卵巢功能衰竭，以排卵障碍、闭经、E2缺乏和不孕为其特征。POF的病因复杂，涉及环境、遗传、自身免疫、感染及医源性等多种因素，目前尚无安全有效的治疗方法，多采用激素替代治疗（Hormone Replacement Therapy，HRT），但该疗法只能改善患者由于激素下降导致的临床症状，并不能从根本上恢复POF患者的卵巢功能和生育能力，且有增加患者血栓性疾病、卵巢肿瘤及乳腺癌的发生风险。卵泡是卵巢的基本单位，主要由颗粒细胞（Granulosa cells，GCs）和卵泡膜细胞组成，对卵母细胞的发育和成熟至关重要。GCs损伤可使得激素水平和卵泡形成异常，导致女性出现POF或不孕。近年随着干细胞治疗技术在各种组织损伤性疾病的研究及应用，有学者尝试用间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）重建卵巢功能，并获得一些令人振奋的结果。本研究通过建立人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells，HUMSCs)与人卵泡液和卵丘GCs共培养诱导分化体系尝试诱导HUMSCs向功能性GCs分化，旨在探索新的有效的POF治疗方法。　　目的：建立一个HUMSCs向GCs分化的培养体系，探讨诱导分化后的细胞是否具有GCs的功能。　　方法：通过BMP4预处理并联合应用人卵丘GCs和卵泡液诱导HUMSCs向卵巢GCs分化；荧光免疫方法检测HUMSCs诱导分化前、诱导分化12d及人卵丘GCs细胞FSHR受体的表达；Real-time PCR方法检测HUMSCs诱导分化前后及人卵丘GCs特异性基因FSHR、AMH、CYP19A1及干细胞多能性相关基因OCT4的表达。　　结果：诱导前HUMSCs（阴性对照组）无绿色荧光表达，人卵丘GCs（阳性对照组）呈强阳性表达。诱导分化后12d，细胞形态己接近贴壁生长的人GCs，可见绿色荧光标记的FSHR阳性表达，但荧光信号稍弱于阳性对照组；干细胞多能性相关基因OCT4表达水平显著下调（P＜0.05），与阳性对照组相近，GCs特异性FSHR、AMH和CYP19A1基因表达水平均显著上调（P＜0.05），表明诱导分化后HUMSCs已经失去干细胞特性，向GCs定向分化，并具备GCs的部分功能。　　结论：初步建立了HUMSCs向GCs分化的体外培养体系；成功诱导HUMSCs分化为卵巢GCs样细胞。