【摘 要】
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目的:探讨miR-200c对骨肉瘤增殖、侵袭和转移作用的影响,从分子层面上分析miR-200c对骨肉瘤生物学性状的影响。方法:（1）qRT-PCR技术检测人骨肉瘤细胞系Saos-2、U2-OS及人软骨细胞系C28中的miR-200c和NDN表达差异。（2）实验组由慢病毒携带miR-200c转染骨肉瘤Saos-2细胞,阴性对照组由空载体病毒转染Saos-2细胞,转染效率用PCR检测。分别检测实验组和
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目的:探讨miR-200c对骨肉瘤增殖、侵袭和转移作用的影响,从分子层面上分析miR-200c对骨肉瘤生物学性状的影响。方法:（1）qRT-PCR技术检测人骨肉瘤细胞系Saos-2、U2-OS及人软骨细胞系C28中的miR-200c和NDN表达差异。（2）实验组由慢病毒携带miR-200c转染骨肉瘤Saos-2细胞,阴性对照组由空载体病毒转染Saos-2细胞,转染效率用PCR检测。分别检测实验组和对照组的增殖（RTCA x CELLigence系统）、侵袭（Transwell实验）、迁移（瘢痕愈合实验）和凋亡（流式细胞仪）。并通过qRT-PCR和Western-Blot凝胶电泳分析miR-200c对NDN表达的影响。（3）采用状态良好的Saos-2细胞构建骨肉瘤裸鼠异体移植瘤模型,利用miR-200c agomir提高实验组miR-200c的表达,绘制生长曲线探讨miR-200c在体内对骨肉瘤生长的影响;并通过qRT-PCR和Western-Blot凝胶电泳检测miR-200c对异体移植瘤模型中的NDN表达的影响。结果:（1）qRT-PCR结果显示,相比人软骨细胞系C28,miR-200c在U2-OS细胞中低表达（P<0.01）,在Saos-2细胞中低表达（P<0.0001）,NDN在U2-OS细胞中低表达（P<0.01）,在Saos-2细胞中低表达（P<0.0001）。并且miR-200c（P<0.0001）和NDN（P<0.0001）在人骨肉瘤组织中均低表达。（2）使用慢病毒转染人骨肉瘤细胞系Saos-2,荧光显微镜显示转染有效率超过90%。经过qRT-PCR验证,miR-200c UP的miR-200c表达量显著高于阴性对照组（P<0.0001）,且miR-200c UP组NDN的mRNA（P<0.001）和蛋白（P<0.001）表达量均增高。相比于对照组细胞而言,RTCA x CELLigence显示miR-200c UP组细胞增殖能力减弱（P<0.05）,凋亡结果显示miR-200c UP组凋亡增加（P<0.001）,瘢痕愈合实验显示miR-200c UP组迁移能力减弱（P<0.05）,Transwell实验显示miR-200c UP组细胞侵袭能力减弱（P<0.001）。（3）体内实验结果显示,miR-200c UP组裸鼠瘤体生长受抑制（P<0.001）。qRT-PCR和Western-Blot凝胶电泳结果显示miR-200c UP组裸鼠瘤体内miR-200c的表达量升高（P<0.001）,NDN的mRNA（P<0.01）和蛋白表达量（P<0.05）亦均升高。结论:（1）miR-200c和NDN在人骨肉瘤细胞系和临床肿瘤样本中的表达量降低;（2）体外过表达miR-200c可抑制Saos-2细胞的增殖、迁移和侵袭能力,增加细胞凋亡比例,并可使得NDN的mRNA和蛋白表达量增高;（3）调高miR-200c的表达在体内可以抑制裸鼠异体移植瘤模型的肿瘤生长,并增加NDN的mRNA和蛋白表达量。提示miR-200c可能靶向作用于NDN影响骨肉瘤的发生发展。
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