苏云金芽孢杆菌Bt15A3菌株crylC基因的克隆与表达

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Bt15A3是分离自土壤的野生菌株,它含有多种优良基因(cry1Aa、cry1Ac、cry1C、cry1D、cry1I及cry2)组合,对棉铃虫、甜菜夜蛾、小菜蛾及美国白蛾均有较高的活性.该文首先对Bt 15A3菌的鞭毛抗原血清型进行了鉴定,发现该菌株属于H21血清型,colmeri亚种.目前国内外尚无使用Bt colmeri亚种为生产菌种的报导.因此Bt15A3菌株的发现与开发,不但为发掘中国野生Bt资源作了有益的尝试,而且为Bt生产菌株的更新换代提供了后备菌株.利用自行设计的引物1Ca0和1Ca2对Bt 15A3中的cry1C基因进行PCR扩增.得到的4.0kb的PCR产物包括cry1C基因的所有编码区及起始密码子上游约400bp的启动子及其上游调控区.以增产菌蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)9509为受体构建转cry1C基因的杀虫、增效双功能工程菌Bc9509-1C,使Bc9509表达出了杀虫晶体蛋白.生测结果表明,cry1C基因的导入使Bc9509获得了对甜菜夜蛾的毒杀作用.Bt15A3菌株中cry1C基因的获得,可以更加深入的了解该菌株中cry1C基因的序列特性,丰富了中国具独立知识产权的cry基因资源.为构建用于联合使用的多功能生防工程微生物及培育抗虫转基因作物提供具独立的知识产权的高效基因源.
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