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甲型流感病毒（IAV）作为全球严重的传染病之一，一直威胁着人类健康，20世纪以来的多次大流行已造成数千万人死亡，多数患者死于IAV诱导的急性肺损伤（ALI）或急性呼吸窘迫综合征（ARDS）。Nox2 NADPH氧化酶是IAV诱导肺上皮细胞产生过量活性氧（ROS）造成肺损伤的重要因素，Nrf2/ARE信号通路是细胞氧化应激的关键通路。本文基于Nox2 NADPH氧化酶和抗氧化反应元件（ARE）构建高通量药物筛选模型，用于抗IAV药物的筛选，并对筛选出的药物进行药效药理机制研究。 基于p47phox与p22phox两亚基相互作用是Nox2 NADPH氧化酶活化的关键，本文构建了Nox2双分子荧光互补相关质粒（SH3/p47phox-pMC、p22phox-pMN）；同时，利用p47phox、p67phox及 ARE启动子序列构建了NCF1、NCF2、ARE启动子荧光素酶报告基因质粒，建立多种细胞水平的药物筛选平台。在上述模型中，ARE-luc比较成熟，可用于后续药物筛选工作。 用ARE-luc模型对134种中药粗提物进行初步筛选，发现青蒿、当归、葛根、白花蛇舌草、槟榔碱均能显著促进ARE转录，其中槟榔碱活性为空白对照的4.72倍。体外实验，利用空斑试验检测槟榔粗提物（ANE）及槟榔碱的抗IAV活性；体内实验，滴鼻感染6周龄Balb/c小鼠建立小鼠肺炎模型，进行槟榔碱药效药理分析，包括：感染第4天小鼠肺组织病毒滴度、炎症因子、超氧化物水平、病理损伤程度及相应通道蛋白水平的检测，及持续2周的体重变化和生存率分析。 体外抗IAV试验显示，ANE可显著抑制PR8增殖，但槟榔碱对PR8复制无明显抑制作用。体内实验，槟榔碱能一定程度减轻肺组织水肿程度，改善病理损伤，极显著（P<0.01）促进IL-10转录，促进HO-1表达，减缓感染小鼠的体重下降，提高生存率。但槟榔碱对TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA的变化及JNK1、Akt、p38MAPK、Erk1/2的磷酸化水平无显著影响（P>0.05）。 由于毒性作用，槟榔被WHO列为一级致癌物，为此我们研究了ANE的致口腔黏膜成纤维细胞纤维化效应及人工牛黄（CB）对它的拮抗效应。体外实验，用ANE诱导口腔黏膜成纤维细胞异常增长模型，进行CB的药效学研究。结果显示，CB可明显抗ANE的细胞毒作用。 总之，我们成功建立了ARE-luc药物筛选模型，并发现ANE良好的抗IAV潜能，槟榔碱在抗IAV诱导的ALI方面也体现出一定的效果。另，CB能有效拮抗ANE的毒副作用，为槟榔碱的进一步开发利用提供了实验依据。