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防御素作为哺乳动物先天性免疫和获得性免疫的重要组成部分，具有抗菌谱广、抗菌能力强、作用机制独特等特点，成为生物学科领域当前研究的热点。猪β-防御素在粘膜上皮细胞和白细胞中大量分布，是机体抵抗外界病原微生物的首次屏障，是先天性免疫的重要因子。为了探索不同品种猪之间肠道防御素表达水平与定位检测，本研究以皖南花猪、皖南黑猪、杂交猪为研究对象，应用实时荧光定量PCR技术检测不同品种猪之间肠道β-防御素表达，利用原位杂交技术进行β-防御素在肠道内的原位表达检测，成功从皖南黑猪肠道粘膜内分离纯化出具有抑菌活性的抗菌肽。具体研究内容和结果如下：1、猪不同肠段β-防御素的表达水平比较根据GenBank中登记的猪β防御素(pBD-1、pBD-2、pBD-3)序列设计保守序列特异性引物，从小肠中提取总RNA，采用一步法反转录后，测序比对，并应用实时荧光定量PCR技术检测比较不同肠段防御素的表达。结果表明：皖南黑猪、皖南黑猪β-防御素序列保守。在3个肠段中，回肠中β-防御素基因表达量最高，在品种间表达差异上，皖南黑猪β-防御素在小肠上表达量极显著高于杂交猪和皖南花猪（p<0.01）。说明β-防御素在品种间存在一定的差异性。2、猪肠道β-防御素的原位表达选取具有表达类型代表性的pBD-1和pBD-2，设计寡核苷酸探针，采用SABC-FITC荧光标记，检测β-防御素在猪肠道中的原位表达。结果表明：pBD-1mRNA在粘膜上皮和粘膜下层有杂交信号，而pBD-2mRNA表达在粘膜下层和固有层有杂交信号。3、猪小肠抗菌肽的分离纯化和抑菌实验采用冰醋酸浸提法、离子交换层析技术对皖南黑猪小肠粘膜抗菌肽提取物进行分离提取纯化，应用琼脂糖弥散法对抗菌肽提取物进行抑菌实验，使用Tricine-SDS-PAGE电泳对纯化产物进行分子量测定，通过标准曲线法检测纯化物的蛋白浓度。结果表明：所得的高纯度抗菌肽对大肠埃希菌和猪肠道分离沙门氏菌有较高的抑菌作用，测定蛋白浓度为0.15mg/mL。以上研究表明，本实验初步探索比较不同品种猪肠道β-防御素的表达，及其mRNA基因在肠道中的原位表达检测，得出在回肠中β-防御素表达量最高，皖南黑猪各肠段表达水平极显著高于其余2个品种，并从皖南黑猪小肠内成功分离纯化出对大肠埃希菌和猪肠道分离沙门氏菌有较高抑菌作用的抗菌肽。