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目的： 构建携带人血栓调节蛋白(hTM)基因的慢病毒表达载体(plenti6.3-hTM-IRES-EGFP)，体外转染兔外周血内皮祖细胞(EPCs)并观察其在EPCs中的表达及对内皮祖细胞生物功能的影响。 方法： 从重组质粒pcDNA3.1/hTM中提取hTM并采用DNA重组技术将hTM基因导入pLenti6.3-MCS-IRES-EGFP慢病毒表达载体中，筛选出阳性克隆与慢病毒包装系统共转染293T细胞产生病毒颗粒;采用密度梯度离心法分离兔外周血中内皮祖细胞;将内皮祖细胞分为实验组、病毒对照组及空白对照组;实验组与病毒对照组分别转染plenti6.3-hTM-IRES-EGFP和pLenti6.3-MCS-IRES-EGFP;空白对照组内皮祖细胞仅加入PBS作观察;流式细胞仪法检测plenti6.3-hTM-IRES-EGFP转染效率，转染72h后用激光共聚焦显微镜观察增强型绿色荧光蛋白表达情况，利用Q-PCR及Western blot法检测细胞中mRNA及hTM蛋白的表达;Dil-ac-LDL和FITC-UEA-1双荧光法鉴定EPCs;利用MTT法、transwell小室法检测各组细胞增殖及迁移活性。 结果： 基因测序及Western blot法证实重组慢病毒载体plenti6.3-hTM-IRES-EGFP构建成功。plenti6.3-hTM-IRES-EGFP转染EPCs72h后，绿色荧光蛋白表达率超过90％，流式细胞仪测定hTM阳性EPCs达92.9％，Q-PCR及Western blot显示转染组EPCs hTM mRNA及蛋白表达呈明显阳性，转染组hTM mRNA表达明显高于对照组。实验组、病毒对照组及空白对照组EPCs的增殖及迁移活性无统计学差异。 结论： 成功构建plenti6.3-hTM-IRES-EGFP重组慢病毒表达载体，转染兔外周血EPCs后，在体外能高效表达基因产物且不影响EPCs的生物学功能，为进一步研究hTM在动脉血栓疾病中的作用奠定了实验基础。