【摘 要】
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防御素是一类具有广谱抗菌活性的阳离子小肽。在本研究中,我们首先从个体发育进程中存在先雌后雄性反转的斜带石斑鱼的垂体SMART cDNA质粒文库中克隆鉴定出一个β-防御素,将
【出 处】
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中国科学院研究生院 中国科学院大学
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防御素是一类具有广谱抗菌活性的阳离子小肽。在本研究中,我们首先从个体发育进程中存在先雌后雄性反转的斜带石斑鱼的垂体SMART cDNA质粒文库中克隆鉴定出一个β-防御素,将其命名为EcBD(Epinephelus coioidesβ-defensin)。该基因全长cDNA大小为558bp,包含一个192bp的开放阅读框,编码63个氨基酸,5’非编码区长28bp,3’编码区长338bp,有多聚腺甘酸尾巴。RT-PCR和Western blot分析表明EcBD特异于垂体和精巢表达。在处于性腺不同发育阶段的石斑鱼的垂体中,EcBD一直保持着高丰度表达。但在不同发育阶段的性腺中,EcBD呈现差异表达。无论是天然性转变还是人工性反转,在间性期性腺向精巢发育的过程中,EcBD的表达不断上调。从EcBD的启动子中鉴定出一个特异的转录因子结合位点POU1Fla,5’缺失实验证实这个位点是EcBD的表达顺势作用元件。免疫荧光分析表明,在垂体中,EcBD定位于神经垂体部的垂体细胞中；在性腺中,仅能在精原细胞以及初级精母细胞中检测到EcBD的表达,在次级精母细胞、精子细胞、精子以及体细胞检测不到。
体外重组蛋白抗菌实验和体内注射EcBD mRNA的抗菌实验均证实EcBD蛋白能特异抑制革兰氏阴性菌生长的活性。而且,EcBD的抗菌活性敏感于钠离子、钾离子、钙离子和镁离子。高离子浓度会抑制EcBD的抗菌活性。相比较而言,EcBD对于二价钙离子和镁离子更为敏感。与转染了相同浓度的pcDNA3.1质粒相比,转染了pcDNA3.1-EcBD的鲤鱼上皮瘤细胞具有明显的抗蛙虹彩病毒的能力。本研究鉴定的这个特异于垂体细胞和精原细胞以及初级精母细胞表达的具有抗菌抗病毒活性的石斑鱼β-防御素可能在以及内分泌中具有重要的作用。
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