【摘 要】
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目的：探讨Notch信号节点分子Notch1、Hes1在人脐带间充质干细胞（hUMSCs）向胰岛前体细胞分化过程中的表达及其与Ngn3的关系。 方法: 1.分离培养并鉴定hUMSCs； 2.采用联合
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目的：探讨Notch信号节点分子Notch1、Hes1在人脐带间充质干细胞（hUMSCs）向胰岛前体细胞分化过程中的表达及其与Ngn3的关系。 方法: 1.分离培养并鉴定hUMSCs； 2.采用联合分阶段诱导法，取P5代hUMSCs向胰岛前体细胞分化，倒置相差显微镜观察诱导前后（第7天、14天、21天）细胞形态变化，免疫细胞化学技术检测诱导后Ngn3、Pdx-1、胰高血糖素的表达； 3.电镜观察诱导前后的胰岛前体细胞与对照组hUMSCs的结构差异； 4.诱导后（第7天、14天、21天）分别取细胞进行免疫细胞化学法、real-time PCR、Western-blot检测Notch信号通路相关分子以及Ngn3的表达变化； 5.加入γ分泌酶抑制剂（γ-secretase inhibitor）DAPT后，Western-blot检测Notch信号通路相关分子以及Ngn3的表达变化。 结果：成功分离培养hUMSCs，经诱导后细胞胞体呈现宽大形态，并出现胰岛前体细胞的集落，免疫细胞化学技术检测诱导21天后细胞Ngn3、Pdx-1、胰高血糖素均呈阳性表达，电镜结果显示胞体内有分泌颗粒；Western-blot检测Ngn3在诱导过程中逐渐升高，至诱导14d达到峰值，21d下降；Notch1在诱导后7d时最高，对照组最低；Hes1的表达7d、14d与对照组无明显差异，于21d下降；添加DAPT后，Notch信号通路节点分子Hes1表达量下降，同时存在Ngn3表达量升高。 结论：Notch信号通路节点分子与Ngn3表达可能存在相互抑制的关系，通过抑制Notch信号通路后，Notch信号通路节点分子表达量降低，Ngn3表达量升高。由此推测，Notch信号通路的持续活化可能抑制了hUMSCs向胰岛前体细胞分化。
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