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目的:本研究通过β-甘油磷酸体外处理大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)，观察其对血管平滑肌细胞细胞胶原表达的诱导，进一步探讨高磷对大鼠血管平滑肌钙化的影响。以高磷为切入点，观察大鼠血管平滑肌细胞分化过程的动态变化特点并探讨其相关的分子机制，用不同的实验方法研究高磷刺激下血管平滑肌细胞各胶原的不同表达，从而为慢性肾脏病患者中心血管疾病高发病率原因的研究提供基础理论依据，帮助临床防治尿毒症心血管事件的发生及新药的开发。
方法:
1.选择SD雄性大鼠，无菌条件下取胸主动脉，原代培养血管平滑肌细胞。
2.细胞鉴定
2.1 双目倒置相差显微镜直接观察细胞形态
2.2 用SABC法对传代的细胞进行A-平滑肌肌动蛋白免疫细胞化学染色。
3.高磷刺激对平滑肌细胞增殖的影响观察以不同浓度的β-甘油磷酸（10mmol/Lβ-甘油磷酸、15mmol/Lβ-甘油磷酸、20mmol/Lβ-甘油磷酸）处理平滑肌细胞，MTT法测定细胞增殖，与空白对照组比较，观察高磷刺激对平滑肌细胞增殖的影响。
4.高磷刺激对平滑肌细胞胶原表达的影响以β-甘油磷酸(10mmol/L)处理平滑肌细胞，分别留取0、3、6、9天的细胞提取RNA，RT-PCR检测Ⅰ，Ⅱ，Ⅹ型胶原mRNA的表达情况，并与空白对照组进行比较。
结果:
1.血管平滑肌细胞培养
1.1 血管平滑肌细胞培养结果
1.1.1 细胞鉴定:双目倒置相差显微镜下，VSMCs为梭形细胞，呈典型的谷-峰状生长。
1.1.2 用SABC法对传代的细胞进行A-平滑肌肌动蛋白免疫细胞化学染色在高倍镜下可以见到胞核用苏木素复染后呈淡蓝色，卵圆形居中，胞质内有大量棕色与细胞长轴平行的平滑肌肌动蛋白丝。
1.2 不同浓度高磷刺激平滑肌细胞观察其增殖结果(MTT结果)MTT法检测血管平滑肌细胞增殖结果显示，10mmol/Lβ-甘油磷酸组细胞增殖情况（0.304±0.005）和15mmol/Lβ-甘油磷酸组细胞增殖情况（0.264±0.005）明显高于空白对照组（0.203±0.010）(P＜0.05)，20mmol/Lβ-甘油磷酸组细胞增殖情况（0.202±0.101）与空白对照组相比无统计学差异(P＞0.05);10mmol/Lβ-甘油磷酸组细胞增殖情况与15mmol/Lβ-甘油磷酸组细胞增殖情况相比无统计学意义(P＞0.05)。
1.3 高磷刺激血管平滑肌细胞Ⅰ型胶原的表达结果PCR电泳高磷组Ⅰ型胶原表达3d（0.932±0.114）、6d(0.715±0.009)、9d（0.652±0.051）高于空白对照组（0.351±0.089），4组之间比较差异有明显统计学意义(P＜0.05);6d（0.715±0.009）低于3d（0.932±0.114），两组之间比较差异有明显统计学意义(P＜0.05);9d（0.652±0.051）明显低于3d（0.932±0.114），两组之间比较差异有明显统计学意义(P＜0.05)。结果显示:Ⅰ型胶原基因表达在第三天升高并达到高峰，第六天、第九天与第三天相比有所下降，但都高于空白对照组。
1.4 高磷刺激血管平滑肌细胞Ⅱ型胶原的表达结果PCR电泳显示高磷组Ⅱ型胶原蛋白基因表达3d（1.071±0.102）低于空白对照组（1.812±0.066）(P＜0.05)，6d（2.035±0.087）高于空白对照组（1.812±0.066）(P＜0.05)，6d（2.035±0.087）明显高于3d（1.071±0.102）(P＜0.05)。结果显示:高磷刺激血管平滑肌细胞Ⅱ型胶原表达第六天升高。
1.5 高磷刺激血管平滑肌细胞Ⅹ型胶原的表达结果PCR电泳显示高磷刺激血管平滑肌细胞Ⅹ型胶原表达3d（0.802±0.066）高于空白对照组Ⅹ型胶原表达（0.677±0.035），2组之间比较差异有明显统计学意义(P＜0.05);9d（0.521±0.045）明显高于空白对照组(0.677±0.035)，2组之间比较差异有明显统计学意义(P＜0.05);6d（0.627±0.091）与空白对照组（0.677±0.035）比较，2组之间比较无统计学意义(P＞0.05);3d(0.802±0.066)明显高于9d（0.521±0.045），两组之间比较差异有明显统计学意义(P＜0.05)。结果显示:高磷刺激血管平滑肌细胞Ⅹ型胶原表达于第三天升高并达到高峰，随着时间的推移，其胶原表达有所下降。
结论:
1.本实验采用组织块贴壁法成功培养出大鼠血管平滑肌细胞。
2.MTT的结果显示:通过使用不同浓度高磷刺激血管平滑肌细胞，血管平滑肌细胞增殖情况在10mmol/Lβ-甘油磷酸刺激下最为明显。
3.高磷刺激大鼠血管平滑肌细胞，观察其各胶原表达情况，发现:Ⅰ型胶原、Ⅹ型胶原表达在第三天升高，而Ⅱ型胶原表达在第六天升高，其表达升高时间晚于Ⅰ型胶原、Ⅹ型胶原表达升高的时间。