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研究目的：
SDR9C7（又称SDR-O）是基因编码短链脱氢酶/还原酶家族9C成员7，被认为是隐性遗传鱼鳞病的致病基因之一。利用TALAN技术成功构建的Sdr9c7基因敲除小鼠研究了Sdr9c7基因的功能，发现新生Sdr9c7-/-小鼠皮肤出现紫绀色，并有黏液渗出，且在出生后数小时后死亡；在这个过程中，新生Sdr9c7-/-小鼠周身血管变黑变粗，出现凝血现象，推测Sdr9c7基因缺失会导致小鼠皮肤发育缺陷和血液凝固的发生。为此，本研究着重探讨了Sdr9c7基因敲除对小鼠皮肤屏障、皮肤发育及血液凝固的影响及其中的分子机理，为更进一步的阐释SDR9C7基因的功能提供一定的基础。
研究方法：
（1）Sdr9c7基因敲除鼠进行繁殖与基因型鉴定：采集新生鼠脚趾组织提取DNA，并进行PCR扩增，对PCR产物进行测序，根据其碱基序列与测序图谱确定小鼠的基因型；（2）对Sdr9c7+/-雌鼠与Sdr9c7+/-雄鼠交配所产生的子代小鼠进行基因型统计，分析其基因型比例，排除胚胎致死的可能；（3）对E16.5d、E18.5d、E20.5d和P0时期的Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-胚胎鼠和新生鼠进行表型观察。（4）对Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-新出生小鼠进行实时观察与称重：即对出生0h、1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h的小鼠进行外观观察、体重监测及死亡时间的确定；（5）运用石蜡切片HE染色法对Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤表皮各层进行差异比较；（6）使用甲苯胺蓝溶液对Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤进行皮肤通透性测定；（7）利用超声实验对从Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤表皮中制备出的角化细胞包膜（Cornified cell envelope，CCE）进行超声，以比较Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤表皮中CCE的脆性差异；（8）使用Trizol法提取Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤组织RNA，qPCR法检测Involucrin、Loricrin和Filaggrin在Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤组织中的表达情况；（9）运用流式分析的方法，对新生Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤组织中T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞和CCR4+细胞进行数量分析；（10）采用qPCR法检测了角质细胞脂质包膜（Corneocyte lipid envelope，CLE）形成的相关基因Aloxe3、Alox12b、Tgm1、Gba和Asha1在新生Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤组织中的表达情况；（11）qPCR法检测了新生Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤表皮中控制角质形成细胞分化与增殖的相关基因K1、K5、K10、K14、K19、K6a、K6b、K16的表达情况；（12）运用流式分析的方法检测E18.5d、E20.5d和P0时期的Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤表皮中角质形成细胞的凋亡情况。（13）采用Western blot法检测TARC在新生Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤组织和血液组织中的蛋白表达水平。（14）采用qPCR法检测TARC在新生Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤组织中的mRNA表达水平。
研究结果：
（1）对新生小鼠表型进行观察发现Sdr9c7-/-小鼠在出生2小时后皮肤出现潮红和发绀现象，并于出生后6-8h死亡。
（2）对Sdr9c7+/+和Sdr9c7-/-新生小鼠组织学观察发现：Sdr9c7-/-新生小鼠表皮基底层、棘层、颗粒层和透明层并无异常，而角质层却是增厚的，且没有形成―篮状‖结构。
（3）对6窝新生小鼠在喂奶前每隔1h进行体重称重监测和外观拍照，结果显示Sdr9c7+/+和Sdr9c7+/-新生小鼠的体重并无明显减轻，但Sdr9c7-/-新生小鼠的体重每小时约下降4%，皮肤脱水实验结果证实Sdr9c7-/-小鼠存在脱水现象。
（4）使用甲苯胺蓝染液对Sdr9c7+/+和Sdr9c7-/-小鼠皮肤进行通透性检测，结果显示经过甲苯胺蓝染液浸泡过的Sdr9c7+/+小鼠皮肤基本没有被染成蓝色，而Sdr9c7-/-小鼠皮肤全身被染成深蓝色。这一实验结果更进一步的证实Sdr9c7基因敲除破坏了表皮屏障功能。
（5）制备皮肤表皮中的角化细胞包膜（CCE）并对其进行超声实验，结果显示Sdr9c7-/-小鼠表皮中的CCEs更易碎，脆性增加。
（6）运用qPCR技术检测了CLE的靶基因Aloxe3、Alox12b、Tgm1、Gba和Asha1的mRNA表达水平，结果显示虽然与Sdr9c7+/+小鼠相比，Tgm1mRNA水平在Sdr9c7-/-小鼠中表达明显增加。但是Aloxe3、Alox12b、Gba和Asha1mRNA表达水平在Sdr9c7+/+小鼠和Sdr9c7-/-小鼠中无显著性差异。这表明，参与共价结合的多数基因表达无明显的变化无法对Sdr9c7-/-小鼠皮肤中共价结合的ω-OH-Cer进行补偿，造成共价结合失败，导致Sdr9c7-/-小鼠无法形成功能性的CLE。
（7）运用流式分析技术检测了皮肤中T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突状细胞这几种免疫细胞，结果显示T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突状细胞的数量在Sdr9c7+/+小鼠和Sdr9c7-/-小鼠皮肤中没有差异，说明Sdr9c7基因的缺陷小鼠皮肤并未发生炎症反应。
（8）利用qPCR技术检测了Filaggrin、Involucrin和Ioricrin基因在小鼠皮肤中的表达水平，结果显示与新生Sdr9c7+/+小鼠相比，Sdr9c7-/-小鼠Involucrin、Loricrin和Filaggrin mRNA表达均显著下调，Involucrin、Loricrin和Filaggrin mRNA表达下调可能是角化细胞包膜（CCE）脆性增加的原因。
（9）使用qPCR技术分别检测了角质形成细胞分化标志蛋白基因K1、K5、K10、K14、K19及角质形成细胞增殖标志蛋白基因K6a、k6b、K16mRNA表达水平，结果显示K1、K5、K10、K14在Sdr9c7-/-小鼠皮肤中显著性降低，说明Sdr9c7基因缺失可能会影响角质形成细胞的分化。
（10）通过流式分析技术检测了E18.5d、E20.5d和P0时期的小鼠皮肤表皮中的角质形成细胞的凋亡情况，结果显示Sdr9c7-/-小鼠表皮中的角质形成细胞在E18.5d、E20.5d和P0时期其凋亡均明显增加，说明Sdr9c7基因缺失会影响角质形成细胞的凋亡。
（11）分别使用Western blot、qPCR和流式分析技术检测TARC在新生小鼠皮肤组织中的表达情况，结果显示TARC在Sdr9c7-/-小鼠皮肤组织中表达是显著性增加的。
（12）分别使用Western blot和流式分析技术检测胸腺和调控活化的趋化因子（Thymus and activation-regulated chemokine,TARC）在新生小鼠血液组织中的表达情况，结果显示TARC在Sdr9c7-/-小鼠血液组织中表达是显著性增加的。
研究结论：
Sdr9c7基因对皮肤发育起着重要的调控作用。Sdr9c7基因缺失破坏了表皮屏障功能，造成小鼠皮肤出现脱水和发绀现象，Sdr9c7-/-小鼠机体因不断脱水而在出生6-8h内死亡。Sdr9c7基因缺失会使表皮角化细胞包膜（CCE）脆性增加，形成无功能的角质细胞脂质包膜（CLE）。Sdr9c7基因缺失会影响表皮角质形成细胞的分化和凋亡。Sdr9c7基因缺失会使Sdr9c7-/-小鼠皮肤组织和血液组织中的胸腺和调控活化的趋化因子（TARC）表达增加。
SDR9C7（又称SDR-O）是基因编码短链脱氢酶/还原酶家族9C成员7，被认为是隐性遗传鱼鳞病的致病基因之一。利用TALAN技术成功构建的Sdr9c7基因敲除小鼠研究了Sdr9c7基因的功能，发现新生Sdr9c7-/-小鼠皮肤出现紫绀色，并有黏液渗出，且在出生后数小时后死亡；在这个过程中，新生Sdr9c7-/-小鼠周身血管变黑变粗，出现凝血现象，推测Sdr9c7基因缺失会导致小鼠皮肤发育缺陷和血液凝固的发生。为此，本研究着重探讨了Sdr9c7基因敲除对小鼠皮肤屏障、皮肤发育及血液凝固的影响及其中的分子机理，为更进一步的阐释SDR9C7基因的功能提供一定的基础。
研究方法：
（1）Sdr9c7基因敲除鼠进行繁殖与基因型鉴定：采集新生鼠脚趾组织提取DNA，并进行PCR扩增，对PCR产物进行测序，根据其碱基序列与测序图谱确定小鼠的基因型；（2）对Sdr9c7+/-雌鼠与Sdr9c7+/-雄鼠交配所产生的子代小鼠进行基因型统计，分析其基因型比例，排除胚胎致死的可能；（3）对E16.5d、E18.5d、E20.5d和P0时期的Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-胚胎鼠和新生鼠进行表型观察。（4）对Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-新出生小鼠进行实时观察与称重：即对出生0h、1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h的小鼠进行外观观察、体重监测及死亡时间的确定；（5）运用石蜡切片HE染色法对Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤表皮各层进行差异比较；（6）使用甲苯胺蓝溶液对Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤进行皮肤通透性测定；（7）利用超声实验对从Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤表皮中制备出的角化细胞包膜（Cornified cell envelope，CCE）进行超声，以比较Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤表皮中CCE的脆性差异；（8）使用Trizol法提取Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤组织RNA，qPCR法检测Involucrin、Loricrin和Filaggrin在Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤组织中的表达情况；（9）运用流式分析的方法，对新生Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤组织中T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞和CCR4+细胞进行数量分析；（10）采用qPCR法检测了角质细胞脂质包膜（Corneocyte lipid envelope，CLE）形成的相关基因Aloxe3、Alox12b、Tgm1、Gba和Asha1在新生Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤组织中的表达情况；（11）qPCR法检测了新生Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤表皮中控制角质形成细胞分化与增殖的相关基因K1、K5、K10、K14、K19、K6a、K6b、K16的表达情况；（12）运用流式分析的方法检测E18.5d、E20.5d和P0时期的Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤表皮中角质形成细胞的凋亡情况。（13）采用Western blot法检测TARC在新生Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤组织和血液组织中的蛋白表达水平。（14）采用qPCR法检测TARC在新生Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠皮肤组织中的mRNA表达水平。
研究结果：
（1）对新生小鼠表型进行观察发现Sdr9c7-/-小鼠在出生2小时后皮肤出现潮红和发绀现象，并于出生后6-8h死亡。
（2）对Sdr9c7+/+和Sdr9c7-/-新生小鼠组织学观察发现：Sdr9c7-/-新生小鼠表皮基底层、棘层、颗粒层和透明层并无异常，而角质层却是增厚的，且没有形成―篮状‖结构。
（3）对6窝新生小鼠在喂奶前每隔1h进行体重称重监测和外观拍照，结果显示Sdr9c7+/+和Sdr9c7+/-新生小鼠的体重并无明显减轻，但Sdr9c7-/-新生小鼠的体重每小时约下降4%，皮肤脱水实验结果证实Sdr9c7-/-小鼠存在脱水现象。
（4）使用甲苯胺蓝染液对Sdr9c7+/+和Sdr9c7-/-小鼠皮肤进行通透性检测，结果显示经过甲苯胺蓝染液浸泡过的Sdr9c7+/+小鼠皮肤基本没有被染成蓝色，而Sdr9c7-/-小鼠皮肤全身被染成深蓝色。这一实验结果更进一步的证实Sdr9c7基因敲除破坏了表皮屏障功能。
（5）制备皮肤表皮中的角化细胞包膜（CCE）并对其进行超声实验，结果显示Sdr9c7-/-小鼠表皮中的CCEs更易碎，脆性增加。
（6）运用qPCR技术检测了CLE的靶基因Aloxe3、Alox12b、Tgm1、Gba和Asha1的mRNA表达水平，结果显示虽然与Sdr9c7+/+小鼠相比，Tgm1mRNA水平在Sdr9c7-/-小鼠中表达明显增加。但是Aloxe3、Alox12b、Gba和Asha1mRNA表达水平在Sdr9c7+/+小鼠和Sdr9c7-/-小鼠中无显著性差异。这表明，参与共价结合的多数基因表达无明显的变化无法对Sdr9c7-/-小鼠皮肤中共价结合的ω-OH-Cer进行补偿，造成共价结合失败，导致Sdr9c7-/-小鼠无法形成功能性的CLE。
（7）运用流式分析技术检测了皮肤中T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突状细胞这几种免疫细胞，结果显示T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突状细胞的数量在Sdr9c7+/+小鼠和Sdr9c7-/-小鼠皮肤中没有差异，说明Sdr9c7基因的缺陷小鼠皮肤并未发生炎症反应。
（8）利用qPCR技术检测了Filaggrin、Involucrin和Ioricrin基因在小鼠皮肤中的表达水平，结果显示与新生Sdr9c7+/+小鼠相比，Sdr9c7-/-小鼠Involucrin、Loricrin和Filaggrin mRNA表达均显著下调，Involucrin、Loricrin和Filaggrin mRNA表达下调可能是角化细胞包膜（CCE）脆性增加的原因。
（9）使用qPCR技术分别检测了角质形成细胞分化标志蛋白基因K1、K5、K10、K14、K19及角质形成细胞增殖标志蛋白基因K6a、k6b、K16mRNA表达水平，结果显示K1、K5、K10、K14在Sdr9c7-/-小鼠皮肤中显著性降低，说明Sdr9c7基因缺失可能会影响角质形成细胞的分化。
（10）通过流式分析技术检测了E18.5d、E20.5d和P0时期的小鼠皮肤表皮中的角质形成细胞的凋亡情况，结果显示Sdr9c7-/-小鼠表皮中的角质形成细胞在E18.5d、E20.5d和P0时期其凋亡均明显增加，说明Sdr9c7基因缺失会影响角质形成细胞的凋亡。
（11）分别使用Western blot、qPCR和流式分析技术检测TARC在新生小鼠皮肤组织中的表达情况，结果显示TARC在Sdr9c7-/-小鼠皮肤组织中表达是显著性增加的。
（12）分别使用Western blot和流式分析技术检测胸腺和调控活化的趋化因子（Thymus and activation-regulated chemokine,TARC）在新生小鼠血液组织中的表达情况，结果显示TARC在Sdr9c7-/-小鼠血液组织中表达是显著性增加的。
研究结论：
Sdr9c7基因对皮肤发育起着重要的调控作用。Sdr9c7基因缺失破坏了表皮屏障功能，造成小鼠皮肤出现脱水和发绀现象，Sdr9c7-/-小鼠机体因不断脱水而在出生6-8h内死亡。Sdr9c7基因缺失会使表皮角化细胞包膜（CCE）脆性增加，形成无功能的角质细胞脂质包膜（CLE）。Sdr9c7基因缺失会影响表皮角质形成细胞的分化和凋亡。Sdr9c7基因缺失会使Sdr9c7-/-小鼠皮肤组织和血液组织中的胸腺和调控活化的趋化因子（TARC）表达增加。