血管内皮生长因子干扰RNA对鼠视网膜VEGFmRNA的抑制作用

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目的 研究血管内皮生长因子(VEGF)小片段干扰RNA(VEGFsiRNA)对人鼻咽癌细胞(CNE-2Z)和鼠视网膜VEGFmRNA的抑制作用,探讨其对视网膜新生血管治疗的可行性。 方法①.体外培养人鼻咽癌细胞(CNE-2Z),并分成正常氧培养组(20%O<,2>)和低氧培养组(1%O<,2>)。采用脂质体(LF2000)介导VEGF-siRNA重组质粒和空载体质粒转染两组细胞,RT-PCR检测VEGFmRNA的表达,确定VEGFsiRNA对VEGFmRNA的抑制效率。 ②.采用Smith的方法,将出生后第7天(P7)的C57BL/6J小鼠连同母鼠一起放入密闭的氧舱中饲养,控制氧浓度为75%±2%,5天(P12)后回到正常氧环境饲养,喂养7天(P19)后处死;通过FITC-Dextran荧光造影视网膜铺片观察视网膜新生血管的形态特征。 ③.将8只P7的C57BL/6J小鼠放在空气中饲养,为正常组(A组)。另将30只P7的C57BL/6J小鼠放入氧舱中饲养(控制条件同上),5天(P12)后出舱并随机分为3组,即对照组(B组)、空载体组(C组)和基因治疗组(D组)。C组鼠玻璃体腔注射空载体质粒;D组鼠玻璃体腔注射VEGFsiRNA重组质粒。RT-PCR检测各组视网膜组织中VEGFmRNA的表达水平;FITC-Dextran荧光造影视网膜铺片观察视网膜新生血管的形态特征。 结果 ①.正常氧培养的CNE-2Z细胞有VEGFmRNA表达,低氧状态下VEGFmRNA表达增多,两者之间差异有显著性(P<0.01);在正常氧和低氧状态下,与正常组和转染空载体组相比,VEGFsiRNA转染组VEGFmRNA的表达均明显下调(P<0.01);正常氧和低氧状态下VEGFmRNA的抑制效率分别为73.5%和67.3%。 ②.高氧诱导的C57BL/6J小鼠视网膜新生血管动物模型中,对照组和空载体组视网膜VEGFmRNA表达明显上调,空载体组和对照组之间VEGFmRNA差异没有显著性(p>0.05);而基因治疗组视网膜组织中VEGFmRNA表达明显下降。 ③.FITC-Dextran荧光造影视网膜铺片结果显示:对照组和空载体组可见视盘周围毛细血管闭塞,有大片无灌注区,周边部可见新生血管丛,伴荧光渗漏;基因治疗组小鼠视网膜视盘周围无灌注区以及周边部新生血管丛明显减少。 结论VEGF特异性siRNA能有效地抑制人鼻咽癌细胞CNE-2Z和C57BL/6J小鼠视网膜新生血管动物模型视网膜中VEGFmRNA的表达,并能有效地抑制视网膜新生血管的生长。
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