南海柳珊瑚Euplexaura rhipidalis抗肿瘤成分的分离纯化与活性研究

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海洋生物资源丰富,其化学成分与陆生生物差别显著,珊瑚和海绵动物中已发现许多具有抗肿瘤、抗菌、抗炎等生物活性的化合物,是海洋药物开发的热点物种。我国南海珊瑚、海绵种类众多,是开发天然活性物质的重要来源。  本文首先采用DPPH和ABTS自由基法,对南海海域采集的9种珊瑚动物和5种海绵动物的75个不同极性萃取部位进行体外抗氧化活性评价;并采用SRB方法测试其中15个萃取部位对HeLa人宫颈癌细胞和A549人肺癌细胞的增殖抑制作用,进行抗肿瘤活性评价。筛选结果表明只有GE-11-2对DPPH·自由基清除率的IC50值小于50μg·mL-1,抗氧化活性显著;GE-23-3、GE-47-3、GE-53-3对两种肿瘤细胞的IC50值均小于12.5μg·mL-1,抗肿瘤效果突出。综合考虑活性筛选结果和粗提物质量,选定柳珊瑚Euplexaurarhipidalis的丙酮提取物GE-23为研究对象。采用高效液相色谱和SRB法对柳珊瑚Euplexaura rhipidalis丙酮提取物GE-23及不同萃取部位进行成分分析和抗肿瘤活性测试。以抗肿瘤活性为导向,优化萃取溶剂组合以富集目标产物,确定优选萃取方法:乙醚萃取-甲醇重溶的方法,所得的甲醇重溶部位EM对HeLa、A549和HepG2肿瘤细胞均有较好的抗肿瘤活性,确定为主要抗肿瘤活性物质的富集部位。采用流式细胞术,以AnnexinⅤ-FITC/PI双染凋亡检测法和PI单染法研究EM部位对肿瘤细胞的凋亡诱导作用和周期分布影响,初步探索EM的抗肿瘤作用机制。采用制备液相方法对甲醇重溶部位EM进行分离纯化,依据色谱峰切分成不同精细组分并对各组分进行抗肿瘤活性评价,结果表明EM-5、EM-6、EM-7组分抗肿瘤活性较好。继续分离、纯化上述活性组分,初步鉴定3个化合物结构并对质量较多的化合物1、2进行初步抗肿瘤活性评价。
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